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022-66387942第0天:细胞接种
→根据下表在V mL细胞生长培养基中培养种子细胞
每个孔、盘子或烧瓶的数量
*对于特定的细胞类型或悬浮细胞,请参考完整的方案。
第1天:转染
→在血清存在的情况下进行转染
→仅使用jetPRIME®缓冲液
→以60-80%的融合率转染细胞
每个孔、盘子或烧瓶的数量
第2-3天:测量基因表达
优化方向:
(1)测试不同的DNA量:X、0.5X和1.5X。
(2)测试不同的DNA/jetPRIME®比例,1:2至1:3。
每个孔、盘子或烧瓶的数量
对于HEK-293和HeLa细胞,可以将DNA量减少到0.5倍,并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。
提高敏感细胞细胞活力的技巧:
(1)转染后4小时更换培养基。
(2)将DNA量减少到0.5倍,同时保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例。
(3)在较早的时间点(例如转染后24小时而不是48小时)分析转染。
(4)检查靶基因是否影响细胞活力。
良好的DNA转染实践:
(1)适当储存jetPRIME®(5±3°C)。
(2)确保细胞在转染前传代两次以上且少于20次。
(3)丢弃过度流畅的细胞。
(4)定期检查支原体污染情况。
(5)使用报告基因来建立和优化转染条件。
(6)血清质量可能会严重影响转染效率。购买新一批血清时或胰蛋白酶检查细胞活力以及转染效率。
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