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该polyplus转染试剂 jetPRIME®产品说明书以DNA转染为例来进行说明：
第0天：细胞接种
→根据下表在V mL细胞生长培养基中接种细胞（每个孔、盘子或烧瓶的数量）
培养皿 | 细胞数量 | V=转染过程中培养基的体积 |
96孔板 | 7500 - 10 000 | 0.1 mL |
24孔板 | 50 000 - 80 000 | 0.5 mL |
12孔板 | 80 000 - 150 000 | 1 mL |
6孔板/35mm | 150 000 - 250 000 | 2 mL |
100 mm/烧瓶 75 cm2 | 1 x 106 - 2 x 106 | 10 mL |
*备注：对于特定的细胞类型或悬浮细胞，请参考完整的方案。
第1天：转染
→在血清存在的情况下进行转染
→仅使用jetPRIME®缓冲液
→以60-80%融合率转染细胞
培养皿 | W=jetPRIME®缓冲液的体积 | X=添加的DNA量 | Y=jetPRIME®试剂的体积 |
96孔板 | 10 µL | 0.1 µg | 0.2 µL |
24孔板 | 50 µL | 0.5 µg | 1 µL |
12孔板 | 75 µL | 0.8 µg | 1.6 µL |
6孔板/35mm | 200 µL | 2 µg | 4 µL |
100 mm/烧瓶 75 cm2 | 500 µL | 10 µg | 20 µL |
第2-3天：测量基因表达
√ Protocol优化：
测试不同的DNA量：X、0.5X和1.5X；
测试不同的DNA/jetPRIME®比例，1:2至1:3；
有关细胞特异性Protocol，请联系益元利康客服获取相关信息。
培养皿 | W=jetPRIME®缓冲液的体积 | X=添加的DNA量 | Y=jetPRIME®试剂的体积 |
96孔板 | 10 µL | 0.05-0.20 µg | 0.10-0.60 µL |
24孔板 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.50-2.25 µL |
12孔板 | 75 µL | 0.4-1.2 µg | 0.8-3.6 µL |
6孔板/35mm | 200 µL | 1-3 µg | 2-9 µL |
100 mm/烧瓶 75 cm2 | 500 µL | 5-15 µg | 10-45 µL |
备注：对于HEK-293和HeLa细胞，可以将DNA量减少到0.5X，并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。
√ 提高敏感细胞细胞活力的提示：
转染后4小时更换培养基；
将DNA量减少到0.5倍，同时保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例；
在较早的时间点（例如转染后24小时而不是48小时）分析转染；
检查靶基因是否影响细胞活力。
√ 良好的DNA转染实例：
适当储存jetPRIME®（5±3°C）；
确保细胞在转染前已传代两次以上且少于20次；
丢弃过度分化的细胞；
定期检查支原体污染情况；
使用报告基因来建立和优化转染条件；
血清质量可能严重影响转染效率，购买新一批血清时或胰蛋白酶检查细胞活力以及转染效率。
更多有关polyplus转染试剂 jetPRIME®产品说明书的介绍，请联系益元利康客服！
polyplus转染试剂 jetPRIME®产品说明书提供商—天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津经济技术发
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孙经理
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