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本说明书以DNA转染为例进行说明：
第0天：细胞接种
→根据下表在V mL细胞生长培养基中接种细胞
培养皿 | 细胞数量 | V=转染过程中培养基的体积 |
96孔 | 7500 - 25000 | 0.125 mL |
24孔 | 40000 - 100000 | 0.5 mL |
12孔 | 80000 - 200000 | 1 mL |
6孔/35mm | 150000 - 400000 | 2 mL |
60mm/25cm2烧瓶 | 200000 - 850000 | 5 mL |
100mm/75cm2烧瓶 | 1 x 106 - 4 x 106 | 10 mL |
*备注：对于特定的细胞类型或悬浮细胞，请参考完整的方案。
第1天：使用jetOPTIMUS®试剂进行转染
→仅使用jetOPTMUS®缓冲液
→以60-80%融合率转染细胞
培养皿 | W=jetOPTIMUS®缓冲液的体积 | X=添加的DNA量 | Y=jetOPTIMUS®体积 |
96孔 | 12.5 µL | 0.13 µg | 0.13-0.19 µL |
24孔 | 50 µL | 0.5 µg | 0.5-0.75 µL |
12孔 | 100 µl | 1 µg | 1-1.5 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 2 µg | 2-3 µL |
60mm/25cm2烧瓶 | 500 µl | 4 µg | 4-6 µL |
100mm/75cm2烧瓶 | 1000 µl | 10 µg | 10-15 µL |
第2-3天：测量基因表达
protocol优化：
（1）测试不同的DNA量：X、0.5 X和1.5 X。
（2）测试不同的DNA/jetOPTIMUS®比例，1:1至1:1.5。
（3）有关细胞特异性协议，请联系益元利康客服获取。
培养皿 | W=jetOPTIMUS®缓冲液的体积 | X=添加的DNA量 | Y=jetOPTIMUS®体积 |
96孔 | 12.5 µL | 0.10-0.20 µg | 0.10-0.30 µL |
24孔 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.25-1 µL |
12孔 | 100 µl | 0.5-1.5 µg | 0.5-2.25 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 1-3 µg | 1-4.5 µL |
60mm/25cm2烧瓶 | 500 µl | 2-6 µg | 2-9 µL |
100mm/75cm2烧瓶 | 1000 µl | 5-15 µg | 5-22 µL |
提高敏感细胞细胞活力的提示：
（1）转染后4小时更换培养基。
（2）将DNA量减少到0.5倍，同时保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。
（3）在较早的时间点（例如转染后24小时而不是48小时）分析转染。
（4）在敏感细胞的还原血清培养基中进行转染。
（5）检查靶基因是否影响细胞活力。
（6）确保细胞在转染前已传代两次以上且少于20次。
（7）丢弃过度培养的细胞。
良好的DNA转染实践：
（1）适当储存jetOPTIMUS®（5±3°C）。
（2）定期检查支原体污染情况。
（3）使用报告基因来建立和优化转染条件。
（4）血清质量可能严重影响转染效率。购买新一批血清时或胰蛋白酶检查细胞活力以及转染效率。
更多有关polyplus转染试剂jetOPTIMUS®产品说明书的内容，请联系益元利康客服！
polyplus转染试剂jetOPTIMUS®产品说明书提供商——天津益元利康生物科技有限公司成立于2018年，坐落于天津经济技术开发区。公司产品线涉及细胞与基因治疗、免疫学、分子
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孙经理
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