用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC抗体有哪些区别？

用于WB，IP，IHC，IF，ChIP，FC实验的抗体有哪些区别？今天我们一起学习一下吧！

WB（western blot，蛋白质印迹）：是生命科学领域实验中一种非常常见的分子生物学实验技术，其原理是先利用SDS-PAGE将蛋白质进行分离，接着将蛋白质转移到膜上，然后再利用抗体进行蛋白质检测。通过分析条带大小和显色信号获得目标蛋白质在细胞或组织样本中的表达情况。在实验过程中由于蛋白质在电泳前进行了加热变性，破坏了保持蛋白质二级和三级结构的氢键，从而使得蛋白质发生了线性化，需要使用识别线性抗原表位的抗体。因此WB抗体一般选用人工合成多肽作为抗原制备出来的抗体。

IHC(immunohistochemical，免疫组化)：是通过抗原抗体特异性免疫反应和化学/荧光呈色反应，利用标记抗体对细胞或组织内的抗原进行研究的技术。在进行免疫组化实验过程中需要将组织或者细胞进行固定，以维持细胞的形态结构和天然状态下的一致，确保组织细胞抗原特异性的稳定。但化学物质的固定会使蛋白质变性，与天然状态下的蛋白质结构会存在有一定的区别，而又不同于WB中加热变性变成线性的结构。

免疫组化抗体识别的是未经加热变性处理的抗原表位，有的属于构象型，有的属于线性的，构象型表位由于受蛋白空间结构限制，加热变性会消失，而线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和变性后的蛋白都含有。因此在做IHC/IF实验中，最合适是用重组蛋白作为抗原制备出来的抗体，除此之外也可以是人工合成多肽作为抗原制备出来的抗体。如果所用的抗体识别的是线性表位(例如识别蛋白上连续的几个氨基酸)那么这种抗体则可以同时用于IHC和WB，而如果抗体识别的是构象表位，则只能用于IHC。

IP(Immunoprecipitation，免疫沉淀)：是通过抗原抗体特异性反应来纯化富集样品中的目的蛋白的一种方法。一般情况下是使目的蛋白与其对应的抗体(protein A/G)形成免疫复合物沉淀而被收集。根据检测目标的不同可以将IP技术分为以下3种：CHIP、RIP、Co-lP。CHIP是利用IP技术富集蛋白后检测与其结合的DNA的量；RIP是检测与其结合的RNA的量；Co-IP则是检测与其结合的蛋白质的量。

免疫沉淀是用抗体去识别结合自然状态下的蛋白质，因此做IP实验时抗体最好选择由天然蛋白作为抗原制备出来的抗体，当然也可以选择由重组蛋白作为抗原制备的抗体，注意最好不要选择由人工合成多肽作为抗原制备的抗体，因为这种抗体识别的位点有可能包裹在蛋白内部而无法识别。

FC(flowcytometry，流式细胞术)：是以IF为基础发展起来的一种专门的细胞分析技术，主要用于细胞的分选。流式细胞中分为两种，一种是将细胞固定之后的流式，在选用抗体时保持与IF/IHC 一致即可；另外一种是活细胞的流式，这种流式最好采用由重组蛋白作为抗原制备出来的抗体或者采用由天然蛋白作为抗原制备的抗体。

在做流式细胞实验中由两种标记方法，直接标记法和间接标记法。使用直接标记法时应选择带有荧光标记的一抗；如果研究的蛋白没有直接标记的一抗，则需使用间接标记法，在使用间接标记法的过程中需注意要同时使用可识别靶标抗原一抗和偶联荧光染色的二抗。

汇总：

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