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核酸如何提取?

 更新时间:2023-07-27    点击量:971

核酸提取是分子生物学研究的基础,而提取的核酸质量好坏也是决定下游实验成败的关键因素之一。因此了解核酸提取的基本原理和方法至关重要,一起来学习下吧!

一、什么是核酸?

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类,其中DNA主要集中在细胞核内、叶绿体和线粒体中,而RNA则主要分布在细胞质中。核酸是分子生物学研究的主要对象,那么无论是对核酸的结构还是核酸的功能进行研究,都需要对核酸进行提取和纯化。

二、核酸提取的基本步骤

1.裂解细胞,释放核酸:使用裂解液裂解细胞,使核酸游离在裂解体系中;

2.核酸的分离与纯化:除去和核酸结合的多糖、脂类、蛋白质等生物大分子物质以及其他杂志分子;

3.核酸富集与洗脱:采用洗脱液处理,富集核酸。

三、核酸提取纯化的常见方法与选择

1.核酸提取方法——溶液法、柱膜法、磁珠法

(1)溶液法

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最jing典的核酸提取方法是溶液法。细胞破碎或者组织匀浆后用苯酚氯仿处理,在水相中主要是以DNA为主,有机相中主要是多糖和脂类物质,蛋白质沉淀于两相之间。离心分层后取水层,经过多次重复操作,并合并含核酸的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇/异丙醇来沉淀核酸,然后再进行分离和纯化、溶解后即可得到高纯度核酸。

(2)柱膜法

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柱膜法原理是基于硅胶膜吸附。硅胶膜表面存在的硅醇基团呈弱酸性,水化后带负电。如果溶液中存在一定浓度的阳离子时,会中和DNA硅醇基团之间的表面负电荷,从而使DNA能够牢固地吸附在硅胶膜表面。反之,如果处于低盐水溶液时,DNA磷酸基团和硅胶膜的硅醇基团之间会存在静电排斥,硅胶膜将DNA释放出来。

(3)磁珠法

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磁珠法运用的是纳米技术,对超顺磁性纳米颗粒的表面进行修饰和改良后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别并高效结合。核酸结合到磁珠上主要是依靠氢键作用、静电作用和疏水作用。在异硫氰酸胍、盐酸胍和外加磁场的作用下,能从样本中将核酸分离出来,并洗去非特异性吸附的杂质,得到纯化后的核酸。

2.磁珠法与柱膜法的比较

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三、提取方法的选择

如果对核酸提取的质量要求不高,可以选择经济实惠的溶液法,选择柱膜法还是磁珠法自动化提取,基本上取决于样本数量,针对大批量的样本,优选磁珠法自动化提取。如果对样本数量较少,则可以选择柱膜法,既快速又经济实用。

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