哪些因素影响电转效率？

电转，也称电穿孔法，是通过脉冲电流在细胞膜上打孔，将外源分子（DNA、RNA 、mRNA等）导入真核细胞内，来改变细胞的特性，从而达到改造细胞的目的，是实现细胞基因功能和蛋白质表达研究的重要工具。那么影响电转效率的因素有哪些呢？让我们一起来看看吧！

一、电转过程

1）电转的完整操作步骤包括电转前操作，电转执行和电转后培养。在进行电转前操作时，电转试剂、细胞与转染底物要进行混匀，如果混匀时过于激烈，会破坏转染复合物的形成，从而导致转染效率降低；
2）在进行电转前操作时，电击缓冲液的选择也很重要，由于细胞对缓冲液的离子组成和渗透压非常敏感，因此组分与细胞质类似的缓冲液有利于细胞电击后的存活；

3）电转执行时，需要控制电场强度和脉冲时间。适当提高电场强度或延长脉冲时间，能使底物更容易进入细胞，但细胞的死亡率也会增加。一般电场强度设置遵循低电场长时程的原则。如果选择内置优化程序的电转系统，如Lonza的Nucleofector系统，则可以节省摸索电场强度和脉冲时间的步骤。

4）转染培养基中含有抗生素会影响细胞转染效率，这是因为转染试剂对细胞有损伤，这时培养基中的抗生素会进一步损伤细胞，因此我们建议使用不含抗生素的培养基或PBS；

5）电转后培养要注意，如果使用传统转染试剂，转染后4-6h后必须进行换液，否则会由于转染试剂毒性而引起细胞死亡，最终影响转染效率。

二、细胞状态

1）细胞污染对细胞状态的影响很大，受到细菌、真菌或支原体污染的细胞都会导致转染效率降低、细胞死亡率增加，尤其是支原体污染悄无声息，因此一定要做好定期的支原体检测，确保细胞状态；

2）细胞培养到不同密度都能用于电转，但最hao的转化效率是在细胞的对数生长期（15代以内，传代后2d）。当细胞处于对数生长期时，有丝分裂较旺盛，表面结构密度比稳定期的细胞差，电转后，细胞膜的恢复能力强，而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA。

三、转染底物状态

1）不同的转染底物对转染效率都会产生不同的影响，例如质粒DNA在大小、用量以及构象这三方面都影响着电转效率，IRES导致转染效率低，转染mRNA需要调整洗涤次数等等；

2）转染试剂与底物的配比，也会影响转染效率，因此需要根据说明书或参考文献来进行配比优化实验，选用最佳配比浓度；

3）底物的内毒素，也会影响转染效率，内毒素含量过高，会导致转染过程中细胞状态变差，从而增加细胞死亡率，降低转染效率，因此要对内毒素进行控制。

影响电转效率的因素有很多，总结下来有三方面：电转过程、细胞状态以及转染底物状态。只有了解影响电转效率的因素有哪些，我们才能够“对症下药"。更多有关影响电转效率的因素问题，请联系天津益元利康生物科技有限公司：