如何提高电转效率？

电转，也称电穿孔法，是通过脉冲电流在细胞膜上打孔，将外源分子（DNA、RNA 、mRNA等）导入真核细胞内，来改变细胞的特性，从而达到改造细胞的目的，是实现细胞基因功能和蛋白质表达研究的重要工具。那么该如何提高电转效率呢？让我们一起来看看吧！

一、细胞收集时：

1)在消化贴壁细胞时，一定要注意终止胰酶反应，防止过度消化；最好使用专业的胰酶中和剂；

2)在进行细胞离心时，使用低转速长时间离心，提升细胞的存活率；

3)选择合适状态的细胞，一般原代细胞可以传1-2次后使用；尽量挑选迭代次数少的细胞，如果是冻存细胞，建议复苏1-2h后使用；

4)选择对数增长期的细胞；

5)做好支原体清除。

二、试剂添加：

1）电转试剂的添加只需室温操作即可；

2）细胞在试剂中停留不超20min，混合好尽快开始实验；

3）转染的底物占比不能大于总体积的10%，比如转染体系100ul，底物最多添加10ul；

4）在消化的细胞进行配置时，一定要离心并完quan去除残留培养基；

5）在加入到电极杯中时，要避免产生气泡，从而影响电脉冲；

6）对底物进行内毒素控制；

7）转染试剂与底物浓度配比控制；

8）如果是mRNA转染，可多洗涤2次。

三、程序设置：

1）使用电转仪，程序已经设定好，可以根据不同的细胞名称，选择对应的最you程序；根据实际情况，可以对程序进行微调，确保转染效率和细胞存活率。

2）使用需要自行设置的仪器，一般电场强度设置遵循低电场、长时程的原则。

四、细胞重悬：

1）转染结束之后，可以先停留10min再加培养基重悬；

2）使用无钙培养基重悬，5-10min后转移细胞到培养皿上；

3）后续的实验一般在转染后24h再进行；

4）电转后的细胞，铺板数量翻一倍。

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