欢迎来到天津益元利康生物科技有限公司网站!
022-66387942qPCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数(Cycle Threshold)。C代表Cycle,T代表Threshold。简单讲,Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时,所对应的循环数。那么你知道qPCR实验中的Ct值有什么作用吗?让我们一起来看看吧!
一、指数扩增、模板量与Ct值的关系
理想情况下,qPCR中的基因经过一定的循环数被指数扩增而积累,扩增循环数和产物量之间的关系是:扩增产物量=起始模板量×(1+En)循环个数。然而qPCR反应并不是一直处于理想情况下,当扩增产物量达到“一定产物量"时,此时循环个数为Ct值,处于指数扩增时期。Ct值与起始模板量的关系:模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。起始模板量浓度越高,Ct值越小;起始模板量浓度越低,Ct值越大。
二、扩增曲线、荧光阈值与一定产物量
qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现,也就是扩增曲线。在PCR早期,扩增处于理想情况下,循环数较少,产物积累少,产生荧光的水平不能与荧光本底背景明显地区别,之后荧光的产生增加进入指数期。可以在PCR反应刚处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,以此作为“一定产物量",并且由此来推断模板最初的含量。因此,一定产物量对应的荧光信号强度,也就是荧光阈值。
在PCR的后期,扩增曲线不再呈现指数扩增,进入线性期和平台期。
三、Ct值的重现性
PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期,此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极hao,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
更多有关qPCR实验中的Ct值问题,请联系天津益元利康生物科技有限公司:
上一篇:如何正确保存抗体?
下一篇:病毒转染实验有何注意事项?