细胞转染过程中需要注意什么？

随着基因和蛋白功能的深入研究，转染已经成为科研实验中最chang用的技术手段之一。那么在细胞转染过程中需要注意什么呢？让我们一起来看看吧！

一、转染试剂

不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。

每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最shi合实验设计的转染试剂。

不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。

二、细胞状态和密度

转染前细胞的状态和密度都非常影响转染效率和后期的实验结果。最shi合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。

细胞状态不好，会导致转染效率低下，为确保良好的细胞状态需注意以下几点：

1.选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。

2.细胞密度（%汇合度）达到60%-80%时，再进行转染，此时转染效率较高。切勿让细胞长到汇合状态或过度生长。

3.同时注意在转染后收细胞时的密度不要过爆。因为细胞长的过爆严重影响细胞的状态（周期进程阻滞，凋亡增加等）从而影响实验结果。一般为前一天下午铺板，第二天上午进行转染，48小时候收细胞进行功能检测。

三、使用优质DNA

DNA的质量影响转染效率：

1.脂质体转染基于电荷吸引原理，如果DNA的纯度差，则其携带的少量的盐离子、蛋白、代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的效率。

2.含有内毒素的质粒对细胞有很大的毒性作用。

3.为实现高效率、低毒性的转染，应使用高质量的DNA（高纯度、无菌、无内毒素）。

4.使用无内毒素的试剂盒和实验方案制备DNA；

5.通过测量OD值来确定DNA纯度和浓度，OD 260/280 值应介于1.7-1.9之间，越接近1.8越好。读数小于1.8，表明样品可能被芳香族产物（即苯酚）或蛋白质污染；读数大于2.0，则表明样品被RNA污染。

6.当转染的DNA会编码对细胞有毒害作用的产物时，可使用弱启动子或可诱导的启动子限zhi毒性基因产物表达对细胞造成的损害。

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