影响ELISA结果的因素有哪些？

ELISA酶联免疫吸附试验是目前临床上zui常用的免疫学检验方法，由于其试剂稳定，易保存，操作简便，结果判断较客观，既适宜于大规模筛查试验，又可用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析，目前已广泛用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子检测等领域。那么你知道影响ELISA结果的因素有哪些吗？让我们一起来看看吧！

一、样品

样品是检测的前提，样品质量会直接影响实验结果。可以用ELISA来检测的样品很多，根据检测项目不同可以是血清、血浆、唾液、尿液等，但大部分还是以血清为样品。作为血清样品，应避免溶血，溶血可能会增加非特异性显色，导致结果出现误差。

血清样品的反复冻融会使血清中的抗体效价下降，所以需要多次检测的血清样品，如在5d内检测完，可4℃保存，如需长时间检测，可进行分装冻存。样品如被细菌污染腐败，可能会导致假阳性。

二、温度

温度主要影响抗原抗体反应，酶促反应速度及非特异性吸附，温度升高可使抗原抗体结合反应加速，但也易引起抗原抗体复合物的解离。酶促反应速度同样随温度升高而增快，但是酶蛋白变性也加快，丧失酶学活性，降低酶的有效浓度而减慢反应速度，温度低时以前者为主，高时以后者为主。

温度是质量控制的一个重要方面，一般允许±1℃的误差。最好水浴，微孔板浮在水面，使温度迅速平衡。如放温箱内温育，微孔板不应叠置，为避免蒸发，板上应加盖，盛放微孔板的湿盒应是金属的，传热容易。空湿盒应预先放在温箱中，以平衡温度，在室温较低时更需要。

三、时间

在温度保证的前提下，时间的控制至关重要，尤其是底物显色的时间控制，显色时间不足或过长会导致实验不成立，无法对检测结果进行判断。

加人标本、试剂及混合的时间称为操作时差。操作时差在每个试验中都存在，对结果或多或少有影响。对手工操作，尤其是样品量大的项目，从加人第一个标本到最后一个标本，需几十分钟，加人试剂及混匀存在很大的时间差异，使抗原抗体和酶促反应时间不一致，易产生假阳性、假阴性结果。

因此，样品过多时，请选择分批操作，对勿须更换移液口吸嘴的酶结合物，底物的加样可选择8联或12联专用的多道加液器。亦可避免单孔滴加底物时遗漏多加。

四、试剂

试剂盒要根据要求进行保存，并保证在有效期内使用，使用前应平衡到室温。新购入的试剂盒要进行校验，检查实验是否成立，不同的试剂盒或不同批号的试剂不可混用。

五、其他

封板膜封闭不严或开启时孔内液体蒸发、震出可导致各孔相互污染；操作时接触到ELISA板底导致透光度改变，影响酶标仪测量结果；

加样图省事，未认真更换移液器吸头，认为其带入标本残留量小，不易影响结果，是部分检测人员常有的心理。因此加标本时必须认真更换移移液器吸头，防止移液器吸头残留痕量产生假阳性结果。加样时应防止溅出污染其它标本。

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