免疫组化实验流程有哪些？

 你知道免疫组化实验流程有哪些吗？让我们一起来看看吧！

一、样品制备

1. 组织固定：根据要求收集人或动物的组织用于IHC分析，冲洗并用固定剂（一般用甲醛）进行固定

2. 组织包埋：将经甲醛固定的组织嵌入石蜡，以长期保持其天然形状和组织结构

3. 切片安装：将组织样品在切片机上切片，并转移至载玻片上干燥保持其形态

4. 脱蜡水化：因切片上的石蜡会妨碍染色，所以需将切片上的石蜡溶出，并水化。脱蜡或水化不全容易造成非特异性背景着色（一般的脱蜡水化步骤是：将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇5min-95%无水乙醇5min-90%无水乙醇5min-80%无水乙醇5min-70%无水乙醇5min-50%无水乙醇5min-蒸馏水5min×3，进行脱蜡水化）。

5. 抗原修复：由于组织在甲醛固定过程中，蛋白之间发生了交联及醛基的封闭从而掩盖抗原决定簇。可以通过高压加热修复抗原，使细胞内抗原决定族暴露，从而提高抗原检测率。

6. 非特定位点封闭：为了防止一抗的非特异性结合造成假阳性，可以选用BSA、羊血清等封闭非特异性结合位点。封闭血清来源一般与二抗保持一致，室温封闭10-30min。

二、样品染色

1. 一抗、二抗孵育：抗体孵育时间、温度及浓度等因素对染色结果都存在很大影响。在4℃下反应缓慢，背景较浅；37℃反应较快时间较短；而室温介于两者之间，选择室温有利于实验的进行。二抗一般室温孵育30min。

2. 底物显色：基于与酶缀合的二抗，抗原通过生色或荧光方式直接检测。

3. 复染封片：组化染色后进行复染可以衬托出组织形态结构，常用的复染剂有苏木精、曙红、甲基绿、DAPI和Hoechst荧光染色。观察结束后使用中性树胶进行封片，可以长久保存。

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