Trizol法提取RNA的注意事项与常见问题有哪些？

Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA有哪些注意事项和常见问题呢？让我们一起来看看吧！

一、Trizol法提取RNA的注意事项

在使用TRIZOL的时候要带手套和眼罩，避免接触到皮肤和衣服，使用化学通风橱，防止蒸汽吸入。

从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。

匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75%酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。

分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。

预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为：

肝和脾6-10μg ,肾3-4μg ,骨骼肌和脑组织1-1.5μg ,胎盘1-4μg ,上皮细胞8-15μg ,成纤维细胞5-7μg。

二、Trizol法提取RNA的常见问题

1. 得率低

（1）样品裂解或匀浆处理不che底

（2）RNA沉淀未wan全溶解

2. OD260/OD280<1 .65

（1）检测吸光度时，rna样品没有溶于水，而溶于了TE中

（2）样品匀浆时加的试剂量太少

（3）匀浆样品时未在室温放置5分钟

（4）吸取水相时混入了有机相

（5）RNA沉淀未wan全溶解。

3. RNA降解

（1）组织取出后没有马上处理或冷冻

（2）待提取RNA的样品没有保存于-60至-70℃,而保存在了-5至-20℃

（3）细胞在用胰酶处理时过度

（4）溶液或离心管未经RNase去除处理

（5）电泳时使用的甲醛pH值低于了3.5

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