PCR纯化回收的步骤与注意事项有哪些？

聚合酶链式反应产物中通常会含有过量的引物、dNTP、酶等，这些会对后续核酸序列测定、酶切、载体构建等产生影响，通过PCR纯化回收可获取纯的DNA扩增产物。那么PCR纯化回收的步骤与注意事项有哪些呢？让我们一起来看看吧！

一、步骤

1.在紫外投射仪或凝胶成像仪上，用刀片切取包含目的条带的琼脂糖凝胶并称重；

2.一般以0.1g胶加入100μl溶胶液的比例（具体根据试剂盒说明添加），按凝胶实际重量加入溶胶液，水浴锅中55℃溶胶（期间可缓慢震动Ep管，将胶溶解wan全）；

3.回收试剂盒中会配有回收柱和废液管，将溶解好的溶液加入回收柱中，并将回收柱套入2ml废液管中；

4.12000r/min离心30-60s，去除废液；

5.将500μl漂洗液加入回收柱，并将回收柱重新套入2ml废液管中，12000r/min离心60-90s，去除废液；

6.重复漂洗一次去除废液；

7.12000r/min离心2min，将回收柱套入高压灭菌后的1.5mlEp管中；

8.向回收柱正中央的滤膜上滴加20-30μl洗脱buffer或高压灭菌ddH2O，静置5-15min；

9.12000r/min离心90-120s；

10.将1.5mlEp管中的回收产物再次滴入到回收柱中央的滤膜上，或向滤膜中央再加10μl洗脱buffer或高压灭菌ddH2O，继续静置5-15min；

11.12000r/min离心120s，1.5mlEp管中收集到的溶液即为纯化回收的PCR产物。

二、注意事项

1. 切取的包含目的条带的琼脂糖凝胶需称重，并按照试剂盒说明要求按比例添加溶胶液；

2. 溶胶需充分；

3. 回收管、ddH2O要提前高压灭菌；

4. 为尽量提高回收率可以将回收产物再次过柱、离心。

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