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磁珠法提取DNA的实验步骤与注意事项有什么?

 更新时间:2024-10-30    点击量:2389

磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种对核酸有吸附作用的特定活性官能团,能同核酸发生吸附反应,从而达到核酸与杂质分离的目的,进而获得纯化的核酸。那么磁珠法提取DNA的实验步骤与注意事项有什么呢?让我们一起来看看吧!

一、步骤

1、样本处理:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。

(1)植物组织:液氮研磨或在特殊裂解液中电动匀浆;

(2)动物组织:液氮研磨或裂解液中手动/电动匀浆;

(3)血细胞:应用红细胞裂解液处理;

(4)细胞:胰酶处理或蛋白酶K处理。

2、DNA纯化:磁珠提前30min从冰箱拿出平衡。磁珠振荡混匀,取处理完成的裂解液50μl中加入50μl磁珠悬液,按1:1充分混匀,室温静置5min,将悬浊液安放在磁力架上,静置5min至上清清澈,去上清,用75%乙醇或80%乙醇200μl清洗沉淀(现用现配),旋转ep管静置30s,弃上清。重复清洗2次,干燥5~10min。

3、DNA溶出:待磁珠无乙醇味,从磁力架上取下ep管,用dH2O或TE溶出DNA,充分混匀,勿用枪头刮蹭磁珠。静置2min。再将ep管安放在磁力架上,上清清澈后吸取上清至新的ep管,即可得到DNA溶液。

二、注意事项

1.适用于大多数动植物组织及培养细胞、全血、尤其适用于微量样品的DNA提取,但对于裂解液过于粘稠的样品不适用。

2.样本处理时一定要快速,减少与空气接触发生降解;液氮的量也要适当。

3.核酸如果不立即使用,则需至少在-20℃保存备用。

4.震荡混匀时一定要让磁珠和液体充分接触,使磁珠更好的吸附DNA。

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