如何制备蛋白质电泳凝胶？

你知道该如何制备蛋白质电泳凝胶吗？让我们一起来看看吧！

一、制备方法

1. 根据垂直电泳槽说明书安装玻璃板，确定需配制分离胶的浓度和体积，配制所需分离胶；

2. 迅速将分离胶注入两玻璃板间隙中，留出灌注积层胶所需空间（梳子的齿长再加1cm，用滴管小心地在分离胶上覆盖一层0.1% SDS（当丙烯酰胺浓度≤8%时）或异丁醇或水（当丙烯酰胺浓度≥10%时），覆盖层可防止氧扩散进入凝胶而抑制聚合反应。将凝胶垂直置于室温下；

3. 分离胶聚合wan全后，倒出覆盖层液体，用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去未聚合的丙烯酰胺，尽可能排除凝胶上的液体；

4. 确定需配制浓缩胶的体积，配制所需浓缩胶，然后直接将浓缩胶灌注在分离胶上，立即插入干净的配套梳子，避免气泡，然后加入浓缩胶溶液以充满梳子之间的空隙。待浓缩胶聚合后，拔出梳子，形成加样孔；

5. 用去离子水将电泳缓冲液贮存液稀释5倍，倒入电泳槽，将加样孔充满，这时加样孔中的气泡可通过电泳缓冲液排除。

二、常见问题

1. 浓缩效应：样品在开始电泳时，通过浓缩胶浓缩成高浓度的样品薄层；

2. 电荷效应：在均一电势梯度和PH的分离胶中，由于各蛋白质的等电点不同所带电荷量不同，在电场中所受到的引力不同，经过一段时间的电泳，各种蛋白质就以一定顺序排列成一条条蛋白质区带；

3. 有分离胶孔径较小，分子量大小和分子形状不同的蛋白质通过分离胶后，所受的阻滞程度不同，因而迁移率不同而被分离。

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