蛋白检测条带的常见问题有哪些？如何解决？

你知道在蛋白检测中条带的常见问题有哪些？该如何解决吗？让我们一起来看看吧！

一、条带出现位置比预期低或高

①当条带出现位置比预期低：

原因：目的蛋白经过剪切或降解，有相同或相似抗原表位的蛋白被抗体检测出

解决办法：样品准备时候要在冰上操作；加入更过蛋白酶抑制剂；更换别的抗体

②当条带出现位置比预期略高：

原因1：蛋白可能被糖基化，或氨基酸基被修饰

解决办法：使用酶去除可能的蛋白修饰；检查抗原序列

原因2：可能有融合蛋白

解决办法：查看表达序列

原因3：蛋白形成二聚体或多聚体

解决办法：加强变性条件

二、条带比较模糊

原因：转膜电压是否过高；转膜中是否有气泡残留；转膜缓冲液组分问题

解决办法：降低转膜电压，重新配制缓冲液，在电转之前小心的移除膜和胶之间的气泡

三、条带分布不均匀

原因：可能孵育时振荡不均匀，抗体和封闭液不结合

解决办法：离心，分离二抗中的聚合体，确保孵育过程中膜wan全浸没在抗体中；孵育时确保震荡均匀，尝试更换封闭液分离胶聚合不均匀，导致蛋白电泳不一致：调整聚合条件，分离胶溶液混匀后再进行聚合

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