免疫细胞（ICC）实验步骤有哪些？

免疫细胞化学 (ICC) 是一种使用荧光抗体或染料来检测细胞内靶抗原的技术。那么你知道免疫细胞（ICC）实验步骤有哪些吗？让我们一起来看看吧！

一、细胞培养/固定

很多抗原在离体组织中只存在很短时间，自溶（autolysis）和坏死（necrosis）使得抗原进一步降解，组织形态和结构被破坏。样品浸泡在合适的固定液中，固定液完quan渗透组织，使蛋白失去活性，并且使组织被保存、稳定在接近 in vivo 状态。

二、通透处理

通透即为对细胞膜进行打孔处理，使抗体能进入到细胞中和抗原发生结合。通常，当抗体检测细胞内蛋白时（包括抗原表位在胞内段的跨膜蛋白），需要对细胞进行通透，一般将细胞样品在含 0.1-0.25% Triton X-100的PBS中孵育5-10分钟。

三、封闭

对样本进行封闭，同样是为了阻断抗体抗原之间的非特异结合，降低背景和潜在假阳性染色。

四、一抗孵育

ICC 实验的成功也依赖于靶标抗原特异性结合的一抗。

五、二抗孵育

对于间接检测，二抗是成功显示一抗分布的关键。使用二抗和相关检测系统能够扩增信号，因为不止一个二抗分子与单个一抗结合。

化学显色与荧光检测：您可以选择化学显色法，使用酶标记的二抗，也可以选择荧光法（免疫荧光），使用荧光染料标记的二抗进行检测。

六、封片观察

显色完成后，通常会对细胞进行复染，复染剂对特定的细胞结构进行染色，增加染色对比效果，明确细胞或亚细胞定位。

复染试剂的选择取决于您对样品的染色方式：显色剂（一种在标准光学显微镜下可见的染料）或荧光染色。

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