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细胞胞内染色操作流程是什么?

 更新时间:2023-10-20    点击量:612

你知道细胞胞内染色操作流程是什么吗?让我们一起来看看吧!

一、细胞计数

将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数;500g离心4min,去上清。

二、制备单细胞悬液

将收集的细胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重悬,400g离心3min,去上清,重复2次;用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x106个细胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl细胞悬液,400g离心5min去上清。

三、固定

每孔加入100μl细胞固定剂重悬细胞,2-8°孵育20min

四、洗涤

400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。

每孔加入100μl细胞通透剂重悬细胞,室温孵育20min

400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。

五、阻断Fc受体

10-20min

六、一抗孵育

每孔加入稀释后的一抗溶液100μl2-8℃反应30min

七、洗涤

400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。

八、二抗孵育

对于非荧光染料直标抗体,加入100μl荧光二抗重悬,避光2-8℃反应30min。对于直标抗体直接跳到步骤九。

九、洗涤

400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。

十、上机分析

200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞,4℃保存,上机分析。

更多有关细胞胞内染色的操作流程,请联系天津益元利康生物科技有限公司:


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