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022-66387942你知道细胞胞内染色操作流程是什么吗?让我们一起来看看吧!
一、细胞计数
将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数;500g离心4min,去上清。
二、制备单细胞悬液
将收集的细胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重悬,400g离心3min,去上清,重复2次;用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1x106个细胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl细胞悬液,400g离心5min去上清。
三、固定
每孔加入100μl细胞固定剂重悬细胞,2-8°孵育20min。
四、洗涤
400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。
每孔加入100μl细胞通透剂重悬细胞,室温孵育20min。
400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。
五、阻断Fc受体
10-20min。
六、一抗孵育
每孔加入稀释后的一抗溶液100μl,2-8℃反应30min。
七、洗涤
400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。
八、二抗孵育
对于非荧光染料直标抗体,加入100μl荧光二抗重悬,避光2-8℃反应30min。对于直标抗体直接跳到步骤九。
九、洗涤
400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。
十、上机分析
用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞,4℃保存,上机分析。
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