影响转染效率的因素及注意事项有什么？

细胞转染是指将外源遗传物质（DNA或RNA）导入真核细胞的技术。 细胞转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染。那么你知道影响转染效率的因素及注意事项有什么吗？让我们一起来看看吧！

一、转染试剂

不同细胞系转染效率通常不同，因此在转染实验前需要根据细胞特性选择合适的转染试剂。可以通过已发表文献和转染试剂提供的已成功转染的细胞株来进行选择。

二、细胞状态

转染前细胞活力和总体健康状况是转染产生变异性的重要来源。一般建议在转染前至少24小时进行传代培养，以确保细胞在传代后处于转染的最佳生理条件，细胞活力大于 90%。最shi合转染的细胞是复苏经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。为确保转染的重复性，一般选择低细胞代次（<30，能确保基因型不变）。如果发现同一株细胞转染效率降低，可以尝试重新复苏细胞以恢复最佳结果。此外，污染会严重影响转染结果。

汇合度：转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此要根据具体的细胞类型、应用和转染技术，来优化确定相应的最佳密度。如使用阳离子脂质体转染时，贴壁细胞一般达到 70%-90% 的汇合度，悬浮细胞达到 5 ×10⁵ 至 2 ×10⁶ 个细胞/mL 的密度，即可获得良好的结果。但不同的转染试剂，针对不同细胞系要求转染时的最适细胞密度各不相同，因此使用新的细胞系或者新的转染试剂时，应进行实验优化并建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等等。不同实验目的也会影响转染时的铺板密度，比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。

三、培养基

不同的细胞或细胞类型都有非常特定的培养基、血清、补充剂要求，选择最shi合细胞类型的培养基和转染方法在转染实验中起着非常重要的作用。一些细胞系和原代细胞可能需要特殊的包被材料（如多聚赖氨酸、胶原蛋白、纤连蛋白等）以附着于培养板并获得最佳的转染结果。

可参考已发表文献或细胞来源处获得获得针对特定细胞类型的合适培养基和转染方法，如果没有相关信息，则需要根据经验或筛选实验确定。

四、血清

一般培养基中存在血清可增强 DNA 转染。但使用阳离子脂质体转染时，一些血清蛋白会干扰复合物的形成，因此应在无血清条件下制备DNA-脂质体复合物。当使用 RNA 转染细胞时，建议在无血清条件下转染，以避免潜在的RNase污染。

五、抗生素

一般用于瞬时转染的培养基中可含抗生素。不过，由于阳离子脂质体试剂可增加细胞通透性，因此也可能增加递送到细胞内的抗生素量，从而导致细胞毒性以及较低的转染效率。因此不建议在转染培养基中加入抗生素。可在转染前铺板细胞时，使用无抗生素的培养基。

对于稳定转染，不应在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是 Gibco Geneticin 选择性抗生素的竞争性抑制剂。在构建稳定的细胞系时，在转染程序后预留 48-72 小时供细胞表达抗性基因，之后再加入选择性抗生素。

六、转染分子类型

质粒 DNA 是最chang用的转染载体。质粒 DNA 的拓扑结构（线性或超螺旋）和大小会影响转染的效率，超螺旋质粒 DNA 瞬时转染的效率zui高。在稳定转染中，相对于超螺旋 DNA，虽然使用线性 DNA 会导致细胞的 DNA 摄取量较低，但 DNA 整合到宿主基因组中的效果更优。虽然寡核苷酸、RNA、siRNA 和蛋白质等其他大分子也可以转染到细胞中，但在使用这些大分子时，需要优化转染条件。

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