竞争法ELISA的原理是什么？

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竞争法ELISA（也称抑制或封闭法ELISA）通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰，来测定该分析物在样品中的含量，可通过以下方式进行：微孔板用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被（即直接法和间接法），再添加一种有部分某种检测的靶标分析物，以竞争结合抗体上的位点。信号与分析物含量呈负相关，因此，如果靶标分析物的浓度较分析物高，靶标分析物竞争性结合有xian量的标记抗体，参考信号将会较靶标分析物的浓度较低的情况增强。

竞争法的理论基础是xian量抗体，只有在xian量抗体基础上，两种抗原才会形成竞争关系。该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质。

竞争法ELISA是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

1. 将具有专一性之抗体固着于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体

2. 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

3. 加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固着的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固着抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。

4. 洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素底物使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。

5. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固着于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固着于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

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