细胞计数通用步骤有什么？有何注意事项？

细胞计数是指对细胞数量进行定量测定的方法。在细胞培养实验中，通过细胞计数来确定细胞培养的密度和数量，可以掌握细胞生长的情况。同时，细胞计数也是衡量不同实验条件下细胞生长情况的重要指标之一。那么你知道细胞计数通用步骤有什么吗？有何注意事项呢？让我们一起来看看吧！

一、细胞计数的通用方法

1. 以贴壁生长的细胞为例，消化后的细胞充分重悬吹散，取一部分转移至干净的EP管内，例如1mL;

2. 使用酒精棉球轻轻擦拭计数板表面和盖玻片，把后者的边缘微微湿润，然后小心盖在计数板的正中间，边缘要能覆盖住计数板上的凹槽；

3. 将刚才转移至EP管内的细胞悬液再次进行重复吹打，直到成为单细胞悬液，然后吸20uL悬液出来；

4. 将移液器吸头抵在盖玻片的上边缘或下边缘，然后缓缓打出液体，此时液体会因为虹吸作用被吸入盖玻片和计数板之间的空隙内；

5. 调整显微镜，使用10倍物镜观察，此时，视野内看到的画面应该如下图所示的中间圆形的红色区域；

6. 接下来，要计算图中蓝色区域的25个格子内的细胞总数，这一块区域的总面积是1mm2；

7. 计算出总数后，按照下方公式进行计算，得到的结果就是细胞浓度，单位是个/mL

「25个格子内的细胞总数 x 10,000 = 细胞浓度」

8. 进一步计算，可以得到细胞总数。

「重悬细胞的培养基体积 x 细胞密度 = 细胞总数」

二、血球计数板的注意事项

1. 细胞悬液的制备：需要将细胞悬液che底吹散为单细胞悬液，否则大量细胞团块的存在会让细胞计数结果有偏差；单细胞悬液准备好后，应立即往下操作，而不能等，否则细胞又会慢慢聚集沉降成团；

2. 计数阶段：有的细胞会刚好落在计数板小方格的线上，此时，要遵循数左不数右，数上不数下的原则进行计数；

3.细胞太多或太少：如果数完25个格子，总数在200-500之间（图a），可以继续往下换算；

如低于200，则应该把整个悬液区域一起计数（图b），然后得数乘以1111得到细胞浓度；

如果大于500，则应该重新计数，但只计算25个放个内的单条对角线上的5个格子的总数（图c），然后乘以50,000得到细胞浓度；

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