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抗体特异性验证方法有什么?

 更新时间:2023-12-04    点击量:820

抗体特异性验证方法有什么?

抗体特异性从始至终备受重视,那么你知道抗体特异性验证方法有什么吗?让我们一起来看看吧!

一、RNA 干扰(RNA Interference)

RNA 干扰是与靶基因序列同源的双链 RNA(dsRNA)所诱导的一种特异性基因沉默,可以迅速阻断基 因活性。siRNA(Small Interfering RNA)  是一种小 RNA 分子(大约 21-25 核苷酸) siRNA 只降解与其序列互补配对的 mRNA, 其调控的机制是通过互补配对来降低相应靶位基因的表达,所以是一种典型的负调控机制。

在抗体特异性检测中,可以通过这种“基因敲降"的方法来验证目标蛋白表达量降低时,抗体与抗原发生结合产生的目的条带 是否会消除或降低。

二、基因敲除(Knock OutKO)

基因敲除是一种遗传工程技术,敲除目的基因,产生目的蛋白不表达的阴性样品,从而使部分功能丧失, 并可进一步对生物体造成影响,进而推测出该基因的生物学功能。在抗体特异性检测中,可以通过这种“基因敲除"方法来验证目标蛋白缺乏时,抗体是否会发生非特异性结合。

三、天然阴性样本

天然阴性样本是指部分蛋白质存在组织、细胞特异性,可以利用天然不表达的细胞或组织作为阴性对照:如 CD20 不在 T 细胞中表达,PAX8 不 在 Hela 细胞中表达。此外,某些蛋白质在特定的生理条件下才表达,或降低表达,或表达量的改变,也可以作为特异性的参考依据。

四、酶法检测

适用于修饰蛋白的抗体验证。蛋白质通常会有一些修饰形式,如磷酸化,糖基化等,可以通过检测修饰前后 western blot 条带的变化来判断抗体的特异性, 这时候就需要添加相应的酶来去除这些修饰形式,如磷酸酶,糖苷酶等。酶法检测是验证抗体特异性的较为迅速简便的方法。

更多有关抗体特异性的验证方法,请联系天津益元利康生物科技有限公司。


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