你知道什么是二抗吗？

你知道什么是二抗吗？让我们一起来看看吧！

一、二抗的定义

第二抗体（二抗）是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗是利用一抗是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体（如IgG、IgM或IgA等）均具有反应性。

二、二抗的设计原理

根据同一种来源的同种亚型抗体的恒定区是保守的，以此充当抗原刺激机体产生的抗体可以识别同种亚型一抗，根据这一原理设计制备二抗。

抗IgG (H+L)恒定区：靶向一抗的重链和轻链恒定区。这些抗体也会与其他类(如IgE、IgD等)发生反应，因为这些类之间共享轻链。更广泛的表位识别(H+L)二抗使其适用于大多数需要二抗的免疫分析。

抗IgG Fc片段或重链恒定区：与抗IgG (H+L)二抗不同，靶向一抗Fc区域或重链的二抗具有类特异性，不会与其他类免疫球蛋白发生反应，因为每一种抗体的重链或者Fc片段是不一样的（见图2）。如果打算在Ip后进行Western blotting分析，建议使用重链特异性二抗来检测位于25kDa分子量附近的目标蛋白，以避免轻链的干扰。此外，Fab片段抗Fc二抗可用于一抗在多次标记实验孵育前预标记。

抗IgG轻链恒定区:靶向一抗的轻链(kappa或lambda)。这些抗体不与一抗重链反应，但识别其他免疫球蛋白类的共享轻链。例如，山羊抗人IgG Kappa轻链二抗不仅能识别IgG亚类，还能识别IgA、IgD、IgE、IgM等轻链。在Ip后进行Western blotting分析时，建议使用轻链特异性二抗来检测来检测位于55kDa分子量附近的目标蛋白，以避免重链的干扰。

抗IgG F(ab’)2片段恒定区：靶向于一抗的F(ab’)2片段区。由于识别了F(ab)区域的共享轻链，它们会与IgA、IgD、IgE、IgM等轻链发生反应。

三、二抗的优势

与仅使用标记一抗直接检测目标物相比，使用二抗识别一抗间接检测目标物具备多种优势。

通用性：二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用。

放大信号：一个一抗分子可以同时结合几个标记二抗分子，从而增强信号并提高检测灵敏度。在有些检测中，可使用生物素化的二抗和链霉亲和素偶联的标记分子来进一步增强信号。

允许进行多重检测实验：由于二抗具有物种特异性，因此可以将实验设计为使用源自不同物种的一抗来检测多种目标物。使用与具有不同波长发射光的荧光染料标记的二抗来检测不同的目标物。

保留互补位：一抗与标记分子的偶联，有可能会影响其抗原结合位点，也称为互补位。这将降低一抗与其靶抗原结合的能力。使用标记二抗后，可以在检测中使用未偶联的一抗而避免影响其与抗原的结合。

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