如何使用PVDF膜？

了解或者做过Western Blot的同学都应该清楚，经过电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜"步骤，将蛋白从PAGE胶转移到膜上进行固定后，才能进行后续各种方法的Western Blot的检测。Western Blot中膜的选择是实验成功的关键点，实验中一般可以选择硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜，PVDF膜结合能力强且具有较强的机械强度，可以重复使用。那么你知道该如何使用PVDF膜吗？让我们一起来看看吧！

一、何为PVDF膜？如何选择PVDF膜?

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20KDa的蛋白选用0.45μm的膜，小于20KDa的蛋白选用0.2μm的膜。

二、PVDF膜使用时要用甲醇浸泡吗？

PVDF膜在使用时需要进行预处理，用甲醇处理的目的就是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜本质是一种疏水性的聚合物，在水溶液中不会浸湿。为了在水性缓冲液和系统中使用PVDF膜，首先必须将其浸泡在50%(v/v)或更高浓度的醇溶液中。甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜。

三、如何确定PVDF膜转膜成功

可以采用染色法来确定转膜是否成功，PVDF膜染料分2类，可逆染料和不可逆染料。

可逆染料在评估印迹之后可被从膜上洗掉。这些操作不干扰后续的免疫检测或印迹上蛋白的其它分析。zui常用的可逆蛋白染料是丽春红。可逆染料的主要缺点在于它们的灵敏度低于不可逆染料，但是在大部分情况下并不影响使用。

不可逆染料通常表现出最佳的灵敏度，但会干扰或阻止蛋白的进一步分析。不可逆染料有氨基黑和考马斯亮蓝等。

四、PVDF膜的保存

在WB曝光结束后仍需要保存膜以便后续使用，膜的保存条件是由与膜结合的蛋白的稳定性决定的。尽管PVDF是一种化学耐受性好的聚合物，有着出色的长期稳定性。但是我们还是建议低温保存，当然室温对于一些蛋白也是可以的。PVDF膜在4℃下最多保存2周，-20℃下最多2个月，-70℃下可以长期保存。

注意：保存在冰箱冷冻室的印迹膜不能受到机械冲击，这会导致膜破损。印迹膜应恢复到室温后才从塑料袋中取出。印迹膜也可放在塑料袋中置于4℃，但应加入叠氮化na等杀菌剂，以防止细菌生长。在使用之前必须彻di洗掉叠氮化物，以免抑制HRP的活性。

更多有关PVDF膜的使用问题，请联系天津益元利康生物科技有限公司。