你知道什么是双荧光素酶实验吗？

在基因表达调控的研究中，报告基因广泛应用，如荧光蛋白、真核抗性和荧光素酶等。在一些临床医学或基础医学文章中，双荧光素酶结合验证实验部分是多数机制研究bi备的实验部分，例如：在通路研究中，尤其涉及到miRNA与功能基因的相互作用时，双萤光素酶报告基因检测实验是bi备的实验要点。那么你知道到底什么是双荧光素酶实验吗？让我们一起来看看吧！

萤光素酶（Luciferase）是自然界中能够产生生物萤光的酶的总称，其中应用较为广泛的是萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）和海肾萤光素酶（Renilla luciferase）。

萤火虫萤光素酶可以催化萤光素氧化成oxyluciferin，在萤光素氧化的过程中，会发出生物萤光，呈现黄绿色，海肾萤光素酶可以催化腔肠素氧化成coelenteramide，在腔肠素氧化的过程中，会发出生物萤光，呈现蓝光，通过酶标仪即可测定所发出的生物萤光。

双萤光素酶报告基因通常以萤火虫萤光素酶为报告基因，以海肾萤光素酶为内参基因，如此所构成的报告系统有检测灵敏度高、动态范围广、内参平衡等优势，因此在实验中得到广泛应用。

常见应用方向：

1. 验证miRNA同mRNA靶向互作。将靶mRNA的3’UTR序列插入报告基因载体，再共转入该miRNA，检测萤光素酶活性。

2. 验证miRNA同circRNA靶向互作。将circRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域，检测萤光素酶活性。

3. 验证miRNA同IncRNA靶向互作。将IncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域，检测萤光素酶活性。

4. 启动子活性分析。

将启动子区域序列进行分段截短，再分别构建入报告基因载体，检测其启动子活性。

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