细胞冻存的原理是什么？

细胞冻存是指将细胞放在低温环境，以达到减少细胞代谢的作用，从而达到对细胞进行长期储存进行保种的目的，以供后续实验或临床使用。那么你知道细胞冻存的原理是什么吗？让我们一起来看看吧！

一、细胞冻存原理

1. 当温度低至-70℃时，细胞内的酶活性全部停止，代谢活动停止，故实现长期保存的目的。

2. 随着温度降低，细胞内外的水分都会结晶，所形成的冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏，从而引起细胞死亡，特别是0~-20℃的阶段，冰晶呈针状，及其引发细胞损伤。在不加任何保护剂条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。

3. 常见的冷冻保护剂是甘油或二甲基亚砜（DMSO）。DMSO能快速穿透细胞膜进入细胞，降低冰点，延缓冻存过程，同时增加细胞膜的通透性，提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而达到保护细胞的目的。

二、保护剂的选择

1. 细胞冻存中， 一般使用DMSO 作为保护剂。在细胞冻存中， DMSO 使用的最终浓度一般是 5-15% ，某种具体细胞的冻存液中的DMSO浓度可以从ATCC查到。

2. 对特别敏感的细胞在冻存时需测试适用的冻存液。例如神经元细胞冻存时需选择无血清冻存液，避免复苏后分化。

三、细胞冻存的最佳时期

1. 用来冻存的细胞一般选择在细胞对数生长期，汇合度约 90% 的时候，这时细胞生长状态好，细胞数量也多，并且在收获细胞前 24 小时换一次培养液。

2. 对培养物进行微生物污染物检测，特别是支原体，确保细胞没有任何的污染。在细胞的收集过程中，实验操作要尽可能的温和，避免细胞受损。

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