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022-66387942EZBioscience® microRNA逆转录试剂盒采用一步法中的Poly(A)拖尾反应和逆转录反应方法合成miRNA的第一链cDNA。通过使用大肠杆菌Poly(A)聚合酶通过添加Poly(A)来延长成熟转录本的3' 端,修饰来自总RNA的成熟miRNA。然后,修饰的miRNA使用Oligo(dT)通用标签引物进行通用逆转录,以合成所有miRNA的第一链cDNA。其中,gDNA Remover主要包括浓缩的DNase和缓冲液。只需在室温(19~27°C)下反应5分钟即可降解95%以上的残留基因组DNA,大大降低了对结果的干扰。
miRNA RT 酶混合物主要包含大肠杆菌 Poly(A)聚合酶、逆转录酶和 RNase 抑制剂。大肠杆菌Poly(A)聚合酶不仅具有高效的Poly(A)拖尾反应效率,而且特异性识别成熟的单链miRNA,从而避免了双链结构miRNA前体的逆转录反应。突变体M-MLV逆转录酶具有很强的抗干扰能力和扩增能力。
4×miRNA RT缓冲液试剂包含Poly(A)拖尾反应和逆转录反应的所有原料和引物,包括 Oligo(dT)-通用标签引物、缓冲液和dNTP,并经过精心优化,确保 Poly(A)拖尾反应和逆转录反应高效。
1.操作快速简单:本试剂盒采用Poly(A)拖尾反应和逆转录反应法一步法合成miRNAs第一链cDNA。无需设计额外的逆转录引物。30 分钟内即可获得包含所有 miRNA 的高质量 cDNA。
2.特异性高:Poly(A)聚合酶不仅具有较高的A-tailing效率,而且特异性识别成熟的单链miRNA,从而避免了双链结构miRNA前体的逆转录反应。
3.高效:该试剂盒采用高效Poly(A)聚合酶和逆转录酶的优化组合,可高效进行Poly(A)拖尾和逆转录反应。与普通商业逆转录产品相比,该试剂盒以最小的定量CT值逆转cDNA,具有优异的逆转录效率。
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