百奥医药骨组织解离试剂盒的使用方法

百奥医药骨组织解离试剂盒可用于骨组织样本单细胞悬液制备，可广泛应用于高通量单细胞测序等相关科学研究实验。那么你知道百奥医药骨组织解离试剂盒的使用方法是什么吗？让我们一起来看看吧！

一、使用方法：

1、用灭菌的剪刀或手术剪将组织切成小块

2、在冰上将组织块儿加入适当的RPMI 1640培养基或PBS缓冲液，清洗至少3次，去除多余xue渍和杂质

3、将洗干净的组织剪碎，剪的越碎越好，增大和消化试剂接触的面积。加入适量的消化试剂。颠倒混匀。

4、放置于酶作用的最佳温度下，一般37°C，进行孵育，每隔5分钟震荡混匀。

5、不同类型、状态的组织消化时间不同，每隔一定的时间质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37°C 消化15-45分钟，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。

6、消化完成后，用合适的细胞筛进行过滤，收集滤液。

7、让细胞沉降并倒出多余的含酶液体。

8、用PBS缓冲液洗涤并重复2-3次。加入适当的培养基或缓冲液，重悬细胞。

9、用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录

二、测试效果

使用该组织解离试剂盒将新鲜人骨组织消化解离为单细胞悬液，利用CountStar全自动细胞荧光分析仪检测细胞活性（AO/PI染色）、结团率、活细胞浓度、细胞直径等参数。然后进行10x Genomics平台单细胞建库测序，获取数据。

制备的单细胞悬液质量较高，活性可达83.85%，结团率仅为3.35%，其他参数也均能满足高通量单细胞测序研究相关实验要求。

从曲线图、捕获细胞数、测序深度、获得基因数结果初步可以看出，数据结果比较理想，例如基因中位数均在1,400个左右，较为理想。

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