磷酸化蛋白研究方法之wako预制胶

磷酸化蛋白对细胞通路的重要性毋庸赘述，这种关键的翻译后修饰参wako预制胶与wako预制胶广泛的细胞活动调节，包括细胞周期、细胞分化、代谢和神经元通讯等。蛋白磷酸化的异常也与众多疾病相关，是疾病机理研究的重要研究方向。那么你知道磷酸化蛋白研究方法吗？让我们一起来看看吧！

    Western Blot是评估蛋白磷酸化状态的常用方法，且大部分实验室具备开展该实验的条件。用SDS-PAGE分离生物样品，随后转移到膜（PVDF或硝酸纤维素膜），采用磷酸化抗体鉴定目的蛋白的磷酸化水平。

    由于磷酸化蛋白的检测结果可能随样本处理或操作误差而变化，研究人员通常用同一种蛋白的总表达水平作为参考，通过确定磷酸化蛋白和总蛋白的相对比值来反映磷酸化情况，判断信号通路是否被激活。

    SuperSep™Phos-tag™是一种预制胶，预先加入50μmol/L的Phos-tag™Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有Zn²+作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。wako预制胶即开即用，使用起来安全可靠，有效期长达6个月，操作方法与普通无二。

SuperSep™Phos-tag™预制胶的应用

电泳条件：30mA(恒流),60 min

样品：5μg/Laneα-酪蛋白(含磷酸化与去磷酸化a-酪蛋白)

普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条条带。

样品缓冲液：Sample Buffer Solution(2ME+)(X4)

电泳缓冲液：SDS-PAGE缓冲液，pH8.5

染色：QUICK-CBB PLUS

  P10%(左):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),10%,13 well

  P15%(中):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),15%,13 well

  A15%(右):SuperSep™ Ace,15%,13well(不含Phos-tag™)

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