Wako石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色产品推介

       检测相关细胞的生理活性是掌握生物体骨代谢状态的有效方法。骨组织使用碱性磷酸酶（ALP）进行染色可明确成骨细胞的成骨潜能，使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色可明确破骨细胞的骨吸收能力。并且在同一切片上进行二重染色时，可同时识别二者

       正常的骨代谢是通过成骨细胞生长与破骨细胞建立骨吸收而维持平衡。成骨细胞的标记酶是碱性磷酸酶（ALP）。破骨细胞的标记酶是抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）。这两种标记酶在组织切片或者培养细胞过程中，被作为成骨细胞、破骨细胞存在的标记指标。

       TRAP/ALP破骨成骨双重染色试剂盒可通过骨组织切片以及培养细胞中TRAP/ALP酶活性进行组织染色。通过观察成骨细胞和破骨细胞的染色成像，可检查细胞的分化状态和骨组织的分布情况。

一、特点：

使用时混合3种溶液，可制备TRAP酶活性染色的显色底物溶液。

ALP酶活性染色使用的是预混物溶液，操作简便。

TRAP的活性部位呈红紫色，ALP的活性部位呈蓝色（茶褐色），可双重染色。适用于骨组织切片（脱钙GMA树脂包埋切片）以及培养细胞。

二、染色方法

染色法是Lorch的Gomori法。使用的是偶氮染料法和耦合法结合的TRAP/ALP染色试剂盒。Lorch推荐切片厚度为8μm，同时也研究了普通的4μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。

染色法结果：偶氮染料法中切片过厚导致酶扩散图像。即用TRAP染色骨质有红染倾向，但即使是4μm厚度，只要增强反应条件（反应温度和反应时间），也能充分染色的。换言之，TRAP染色中反应温度从室温调至37℃，反应时间从30分钟调至45分钟或60分钟。ALP染色在37℃反应45分钟至3小时，或者室温（10-15℃）下反应时间增加至一晚。此结果显示，两者色调平衡，染色效果好。但是，反应条件的增强导致ALP染色切片产生了很多色素颗粒。另外，TRAP和ALP的染色顺序哪一个先染色都是可以的。如果先进行ALP染色时，在TRAP阳性部位呈明显的红色，鲜艳处为破骨细胞。获得比较好的标本。但是，ALP的反应产物经过TRAP溶液处理后，会产生白色混浊颗粒，沉淀在组织上。因此，先TRAP染色，接着ALP染色的方法是可行的。封装法是利用甲基绿数秒间核染色处理。水洗后，37℃下干燥，二甲苯浸透，用马里醇(Marinol)永jiu封存。

脱钙石蜡包埋切片的TRAP/ALP双重染色

用1年龄小鼠腰椎的EDTA脱钙石蜡切片，进行TRAP/ALP双重染色。

TRAP阳性将破骨细胞染成红色，ALP阳性将细胞活性强的细胞（成骨细胞软骨细胞）染成褐色。（上：弱扩大，下：强扩大）

TRAP和ALP的双酶染色实验中通过对固定、脱钙、染色进行多处改良，实现了对脱钙石蜡标本的染色。但是酶扩散图像对TRAP染色的效果ji佳。出于各种原因的考虑，关于固定步骤的影响，如果固定不充分的话，容易抑制脱钙水平。进而导致酶扩散的发生。另外，注意脱钙本身的影响也是有必要的。总而言之，和非脱钙标本相比较，脱钙标本的扩散图像更加明显。脱钙会使酶扩散变强。

天津益元利康生物科技有限公司，代理Wako石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色产品，欢迎选购！