常见的细胞凋亡检测方法

　　细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束生命，最后裂解为若干凋亡小体，被其他细胞吞噬的过程，也称为程序性细胞死亡。细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育、维护内环境稳定的方式，凋亡过程是由基因控制的细胞主动死亡过程。那么你知道常见的细胞凋亡检测方法有什么吗？让我们一起来看看吧！
 

　　一、基于生物学功能的方法：
 

　　1.Annexin V/PI检测磷脂酰丝氨酸 (PS)
 

　　在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜内侧；细胞凋亡早期，PS会从细胞膜胞质外翻到细胞膜外侧。Annexin V (膜联蛋白V)是一种Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可与外翻的PS特异性结合，因此Annexin V 常作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI) 染色液是一种不能穿透细胞膜的红色核酸染料，可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。
 

　　Annexin V 经荧光素标记后作为荧光探针，如Annexin V-FITC ，与PI联合(凯基货号：KGA107)染色后，正常细胞基本无荧光(Annexin V-/PI-)，早期凋亡细胞呈绿色荧光(Annexin V+/PI-)，晚期凋亡细胞及坏死细胞则呈绿色和红色荧光(Annexin V+/PI+)。借助流式细胞术即可检测细胞的凋亡情况。此外，除了用FITC标记Annexin V 之外，也可以用EGFP、PE、APC、mCherry等作为荧光探针，也可以用7-AAD来替代PI作为核酸染料。
 

　　2.JC-1检测线粒体膜电位凋亡早期细胞，线粒体膜通透性增加，线粒体膜电位(ΔΨm)下降甚至消失。线粒体膜电位的下降被认为是细胞凋亡过程中最早发生的生物学变化。一旦线粒体膜电位被破坏，细胞凋亡将不可逆转。
 

　　二、基于生化标记的方法：
 

　　1.TUNEL法检测DNA片段原位
 

　　细胞凋亡形成的DNA断裂会暴露DNA链的3’-OH末端，末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)可催化断裂DNA的3′-OH端的核酸聚合反应，加入带有荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素标记的dUTP，显色反应后可特异地进行原位凋亡细胞的检测。正常或增殖细胞几乎没有DNA的断裂，故很少被染色。TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(凯基货号：KGA7072)适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片或爬片)的凋亡原位检测。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或激光共聚焦等成像设备检测到凋亡细胞。
 

　　2.彗星电泳检测DNA片段化
 

　　彗星电泳实验的原理：当各种内源性和外源性因素诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到电解液中，而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。详细操作和数据分析可参考干货|彗星电泳法检测DNA损伤-从实验到数据分析。
 

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