Elabscience乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性比色法测试盒(E-BC-K771-M)现货供应

Elabscience乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性比色法测试盒(E-BC-K771-M)可用于以乳酸脱氢酶(LDH)释放为指标的细胞毒性检测。

检测原理：

乳酸脱氢酶催化乳酸和 NAD+反应产生丙酮酸和 NADH，NADH在PMS作用下，将电子传递给 WST-8，产生黄色的产物，其在450 nm有特征吸收峰，从而可以通过比色法来定量乳酸脱氢酶的活性。

操作步骤：

样本处理：

① 96 孔细胞培养板根据以下分类加样(每一种分类至少三个复孔)：

空白孔：100 μL 无细胞的培养液(推荐使用含 1%血清的低血清或无血

清培养液)；

样本对照孔：100 μL 待检测细胞(约含 5000-10000 个细胞)；

最大酶活对照孔：100 μL 待检测细胞(约含 5000-10000 个细胞)；

样本测定孔：100 μL 待检测细胞(约含 5000-10000 个细胞)；

② 将 96 孔细胞培养板置于 37°C，含 5% CO2空气及 100%湿度的细胞培养箱中培养 24h。

③ 向步骤②中的空白孔，样本对照孔中分别加入 10μL 的培养液向步骤②中的样本测定孔中加入 10 μL 不同浓度的药物刺激。

④ 37°C，含 5% CO2 空气及 100%湿度的细胞培养箱中培养(根据不同实验细胞需求选择适当的孵育条件和时间)。

⑤ 在结束培养前 1h 从细胞培养箱中取出 96 孔细胞培养板，在最大酶活对照孔中加入 10 μL 的试剂一，并反复吹打混匀；

⑥ 37°C，含 5%CO2空气及 100%湿度的细胞培养箱中继续培养 1 h；

⑦ 将 96 孔细胞培养板用酶标板离心机 400 x g 离心 5 min，吸取上清液待测。

注：若无酶标板离心机，可将细胞液用移液枪吸打均匀后，移取至离心

管中，使用普通离心机离心

样本检测：

① 取 96 孔酶标板，按上述细胞培养过程划分为空白孔、样本对照孔、最大酶活对照孔和样本测定孔，然后向各孔中加入50μL对应的待测上清液。

② 向步骤①酶标板各孔中加入50μL反应工作液，酶标仪震板5 s混匀。

③ 37°C，孵育10 min；(反应时间可根据显色深浅延长或缩短，建议测定多个不同时间点的OD值，以便于筛选，尽量控制样品对照孔的OD值小于0.8，最大酶活对照孔的OD值小于 2.0)。

④ 向步骤③中各孔加入 20μL试剂五，混匀，终止反应。

⑤ 酶标仪上450 nm 波长处测定各孔OD值，并设定600 nm参比波长，扣除参比波长的OD值，为所需有效吸光度值

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