Elabscience Annexin V-APC/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒产品介绍

Elabscience®自主研发的 Annexin V-APC/PI Apoptosis Kit，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。 Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生 凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被荧光染料 APC 标记的 Annexin V 结合，可 通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可与双链 DNA 特异 性结合并产生强烈的荧光，与 Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。 本试剂盒检测喜树碱诱导的 Jurkat 细胞凋亡效果如下图所示：

实验操作：

一步法

1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300×g 离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。

2．取1~5×105重悬的细胞，300×g离心5min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer重悬细胞。

3．细胞悬液中加入5μL的 Annexin V-APC Reagent和5μL的PI Reagent (50μg/mL)。

4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。

5．立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。

注：流式细胞仪检测时Annexin V-APC可用APC通道，PI优先选择 ECD 通道，其次是 PE 通道；如果样本有 FITC通道的自发荧光，则选PerCP/Cy5.5 通道。

两步法

1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300×g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。

2．取1~5×105重悬的细胞，300×g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入100μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer重悬细胞。

3．细胞悬液中加入2.5μL的Annexin V-APC Reagent和2.5μL的PI Reagent (50μg/mL)。（由于两步法分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴定后加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。）

4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。

5．加入400μL稀释的 1×Annexin V Binding Buffer，混匀样本。

6．立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。

注：流式细胞仪检测时Annexin V-APC可用APC通道，PI优先选择ECD通道，其次是PE通道；如果样本有FITC 通道的自发荧光，则选择PerCP/Cy5.5通道。

注意事项：

1. 本产品仅供科研使用。

2. 检测贴壁细胞时，需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞，并与后续收集的贴壁细胞一起检测。

3. 应尽量避免消化贴壁细胞带来的机械损伤。同时，胰酶的消化液中应尽量不含 EDTA，因为 EDTA

会影响 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸的结合。

4. 如果使用含 EDTA 的胰酶，收集细胞后应充分清洗，确保 EDTA 被去除干净。

5. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

6. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽

量注意避光保存。

7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

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