天根BL21(DE3)感受态细胞(CB105-02)现货供应

该感受态细胞用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7 噬菌体 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于 BL21 的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。转化效率可达 107 cfu/µg。

本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10’cfu/ug，-90~-65℃保存几个月转化效率不发生改变。

操作方法：

1.取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 ，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

2.向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻弹混匀，在冰浴中静置30 min。

3.将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 min，该过程不要摇动离心管。

注意:此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 min左右:如果室温较低，可延长时间至8-15 min左右。条件允许建议使用42℃℃热激方法。

4.向每个离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min(150 rpm)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5.将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37C培养12-16 h。

注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板;反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μI转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4°C保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：

1.感受态细胞应保存在-90~-65℃，不可冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

2.进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3.为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到zui低。

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