天根DH5α感受态细胞(CB101-01)产品介绍

DH5α感受态细胞是一种常用于质粒克隆的感受态细胞，其φ80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选，转化效率高达108 cfu/µg。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒 DNA的提取。

天根DH5α感受态细胞(CB101-01)是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒(随产品配备，浓度为0.1 ng/µl)检测，转化效率可达108cfu/µg，-90~-65℃保存几个月转化效率不发生改变。

操作步骤：

1.取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

注意: 一次转化感受态细胞的建议用量为50-100µl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100µl感受态细胞为例。

2.向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻弹混匀，在冰浴中静置30min。

3. 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 min，该过程不要摇动离心管。

注意:此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 min左右，如果室温较低，可延长时间至8-15 min左右。条件允许建议使用42℃C热激方法。

4.向每个离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床振荡培养45min(150rpm)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5.将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16 h。

注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板;反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000rpm,2 min)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4°C保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

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