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ELISA实验常见问题及解决方法

 更新时间:2024-04-07    点击量:607
  酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术,由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年描述。该测定依赖于抗原-抗体相互作用的原理,并利用酶和比色检测来量化目标分子,主要用于检测和量化生物样品中特定蛋白质、肽、抗体或抗原的存在。ELISA测定通常应用于各个领域,包括临床诊断、药物研究和生命科学基础研究。那么你知道ELISA实验常见问题及解决方法吗?让我们一起来看看吧!
 
  一、高背景
 
  原因:洗板不充分、Streptavidin-HRP 加样量过高、孵育时间是否过长、样本的交叉污染
 
  解决方法:检查洗板是否按要求进行;洗板不充分;浓缩洗涤液有结晶就使用,导致洗涤不充分;检查SA-HRP是否按要求的浓度配制;检查孵育时间是否按要求进行;注意实验过程中可能造成样本交叉孔间反应的操作。
 
  二、无信号值
 
  原因:试剂使用顺序错误、试剂配制错误、试剂配制浓度错误
 
  解决方法:检查试剂使用顺序是否存在问题,重复测试;检查是否存在试剂配制错误;检查试剂是否因标准蛋白、抗体或SA-HRP浓度配制过低造成信号值无。
 
  三、过强的信号值
 
  原因:洗板不充分、TMB底物变质、Streptavidin-HRP 加样量过高
 
  解决方法:
 
  洗板不充分,造成SA-HRP残留。检查洗板是否按要求进行;如使用洗板机,请充分冲洗管路并确保每个孔都被全部冲洗;TMB底物是否存在变蓝,使用新的底物试剂;避免使用金属物质接触底物造成变质失效;检查SA-HRP是否按要求的浓度配制;检查加样量是否按要求进行。
 
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