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022-66387942产品名称:NEB rCutSmart缓冲液(B6004V)现货供应
产品货号:B6004V
产品品牌:NEB
产品简介:
NEB rCutSmart缓冲液(B6004V)适用于各类限制性内切酶,超过 210 种限制性内切酶都能在rCutSmart缓冲液中表现出百分之bai的活性,从而极大地简化了实验过程中双酶切反应的准备工作。rCutSmart 缓冲液中富含重组白蛋白,因此可减少试管数量和移液操作步骤。此外,许多DNA修饰酶也能在rCutSmart缓冲液中保持100% 活性,因此无需进行后续纯化。
此外,New England Biolabs为每种限制性内切酶提供了一种采用颜色标记的10X NEBuffer 反应缓冲液,以确保酶保持最佳(100%)活性。New England Biolabs的大多数酶均配有四种标准NEBuffer 缓冲液之一。这些缓冲液中含有重组白蛋白。
使用方法:
同时用两种限制性核酸内切酶消化 DNA 底物(双重消化)是一种常见的省时程序。选择最hao的NEBuffer以提供优化酶活性的反应条件,并避免与某些酶相关的星形活性是一个重要的考虑因素。每种酶都配有最佳的 NEBuffer,以确保 100% 的活性。NEBuffer 组合物列在缓冲区页面上。
设置双消化
· 可以在 rCutSmart 缓冲液™中设置含有 NEB 限制性内切酶的双重酶解。否则,请选择对两种酶都具有最大活性的 NEBuffer。如果对星体活性有顾虑,请考虑使用我们的高保真 (HF®) 酶之一。
· 根据推荐方案设置反应。任何反应中甘油的最终浓度应小于5%,以尽量减少星活性的可能性。例如,在50μl反应中,加入的酶的总量不应超过5μl。 NEBcloner也可用于确定推荐的双消化条件。
· 如果需要两种不同的孵育温度,请选择最佳反应缓冲液并相应地设置反应。加入第一种酶并在所需温度下孵育。然后,加热灭活第一种酶,加入第二种酶并在推荐温度下孵育。
· 根据酶在非最佳NEBuffer中的活性等级,可以调整单位数或孵育时间,以补偿较慢的裂解速率。限制性内切酶性能图表可指示星形活性是否是次优缓冲液的问题。
设置顺序消化
· 如果没有两种酶表现出>50%活性的缓冲液,则可以进行顺序消化。
· 使用推荐缓冲液中盐浓度zui低的限制性核酸内切酶设置反应并孵育完成。
· 调整反应的盐浓度(使用少量浓盐溶液)以近似第二限制性核酸内切酶的反应条件。
· 加入第二种酶并孵育以完成第二反应。
· 或者,可以使用离心柱在第二次反应之前分离DNA。
产品选购:
货号 | 产品名称 | 规格 |
B6004V | rCutSmart缓冲液 | 2.5 ml |
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