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022-66387942产品名称:索莱宝Solarbio小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒(P8860)现货供应
产品货号:P8860
产品品牌:索莱宝
产品简介:
规格 | 200mL/KIT |
有效期 | 2年 |
储存条件 | RT,避光 |
单位 | 盒 |
产品组成:
各种动物脾脏淋巴细胞分离液 | 200mL |
全血及组织稀释液 | 200mL |
细胞洗涤液 | 200mL |
实验流程:
淋巴细胞分离方法(仅供参考)
1. 制备脾脏的单细胞悬液。
2. 取一支适当的离心管,加入与脾脏单细胞悬液等量的分离液(分离液最少不得少于3 mL,总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果)。
3. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液,然后小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。)
4. 室温,水平转子500~900g,离心20~30min。(根据脾脏单细胞悬液的量确定离心条件,单细胞悬液量越大,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件可以自行摸索,以达到最佳分离效果)。
5. 离心后,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为稀释液层;第二层为环状乳白色淋巴细胞层;第三层为透明分离液层;第四层为红细胞层。
6. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞至另一洁净的 15mL离心管中,向离心管中加入10ml细胞洗涤液洗涤白膜层细胞,250g,离心10min。
7. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心 10min。
8. 重复步骤7
9. 弃上清,细胞重悬备用。
脾脏单细胞悬液的制备方法(仅供参考)
脾脏研磨的方法:
1. 无菌条件下摘取脾脏,撕去脾脏被膜,用眼科剪将脾脏剪成小块。
2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上,加入少量全血及组织稀释液(保证脾脏及获得的细胞处于液体环境中)。
3. 将脾脏放置于筛网上,使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脾脏(尽量控制研磨力度,保持筛网悬空,避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡)
4. 研磨后使用全血及组织稀释液冲洗筛网,收集细胞悬液,再经滤网过滤。
相关文献:
[1] Yuying Liu,Xiaoyu Liang,Wenqian Dong,et al. Tumor-Repopulating Cells Induce PD-1 Expression in CD8+ T Cells by Transferring Kynurenine and AhR Activation. Cancer cell. March 2018. (IF 23.916)
[2] Qiushuang Zhang,Chao Xie,Dongyu Wang,et al. Improved Antitumor Efficacy of Combined Vaccine Based on the Induced HUVECs and DC-CT26 Against Colorectal Carcinoma. Cells. May 2019. (IF 5.656)
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P8860 | 小鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒 | 200mL/KIT |
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