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产品名称：南京建成丙氨酸氨基转移酶测试盒微板法(C009-2-1)现货供应
产品货号：C009-2-1
产品品牌：南京建成
产品规格：96T
操作过程：
1、样本前处理:
①、血清（浆）及其它液体样本待测：直接测定。
②、动物组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）：体积 (mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件 下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。
③、培养细胞样本前处理：将收集好的细胞用等渗缓冲液（推 荐 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗 1～ 2 次；1000 转/分,离心 10 分钟,弃上清,留细胞沉淀，加入匀 浆介质（推荐加入 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生 理盐水），冰水浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的 匀浆液不离心，待测。
2、操作表：
测定孔 | 对照孔 | |
基质液（μL）37℃已预温 | 20 | 20 |
待测样本（μL） | 5 | |
37℃反应 30 分钟 (测定孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部基质液中， 反复吸打混匀,但注意不要吸入气泡) | ||
2，4—二硝基苯肼液（μL） | 20 | 20 |
待测样本（μL） | 5 | |
37℃反应 20 分钟 (对照孔每吸取一个样本，将吸嘴伸入孔板底部液体中，反 复吸打混匀, 但注意不要吸入气泡) | ||
0.4mol/L 氢氧化钠液（μL） | 200 | 200 |
轻轻水平摇动 96 孔板混匀，室温放置 15 分钟，波长 510nm，酶标仪测定各孔 OD 值，以绝对 OD 值(测定孔 OD 值减去对照孔 OD 值），查标准曲线，求得相应的 ALT/GPT 活力单位。 | ||
注意事项：
1、比色法中常用的有赖氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King）法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分光 光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报告结果，比较准确。 卡门氏单位定义：1mL 液体，反应液总容量3mL，波长340nm，1cm 光径，25℃，1min 内所生成的丙酮酸，使NADH氧化成 NAD+而引起吸光度每下降0.001 为一个单位（1卡门氏单位=0.482 U/L，25℃）。
2、一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。所以，成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄疸或溶血血清，每份标本应作对照孔。
3、酶活力超过 150 卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。
4、应将一般血清的对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日常质控的指标之一；如相差大，可考虑α-酮戊二酸浓度、DNPH浓度及仪器等原因引起。
5、血清中 ALT 在室温（25℃）可保存2 天，在0～4℃可保存一周，在-25℃可保存 1 个月。
欢迎订购：
货号 | 产品名称 | 规格 |
C009-2-1 | Alanine aminotransferase Assay Kit | 96T |
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孙经理
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