简石生物尿液DNA提取试剂盒（离心柱）（TD361）产品介绍

产品名称：尿液DNA提取试剂盒（离心柱）

产品货号：TD361-50 (50 次反应)

产品亮点：

从高达40毫升的尿液中轻松地纯化细胞DNA/cell-free DNA。

试剂盒配套的尿液稳定剂(UCB)可以使DNA在室温下稳定保存长达1个月。

纯化柱设计确保DNA适用于所有敏感的下游应用，包括PCR、DNA测序、芯片和DNA甲基化分析等

技术简介：

样品来源-尿液样本，每次制备最多40ml的尿液。如有需要，样品体积可按比例增加或减少。

DNA质量-高质量的DNA可用于下游应用，如PCR、亚硫酸盐处理/甲基化检测、芯片等。

DNA产量-柱子的DNA结合容量为5 u8。请注意，DNA产量可能会因尿液本身而异。女性尿液通常比男性尿液产生更多的DNA。健康女性个体的尿液DNA平均范围为6-1000ng/ml。健康男性个体的DNA平均范围2-20ng/ml

DNA大小-能够从100 bp到23 kb恢复DNA片段。

所需设备-离心机、微离心机和热块/水浴。

缓冲液制备：

将48ml100%乙醇(52ml95%乙醇)加入12ml尿液DNA洗涤缓冲液2中，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！

选择性添加项:如遇难处理样品，可以考虑向基因组DNA裂解液中加入B-巯基乙醇(用户自备)，最终稀释为0.5%(v/v)，即每50ml加入250微升

实验流程：

从≤40ml的样品中提取 DNA

除非特殊说明，一般在常温(15-30°C)进行以下操作步骤。 以下操作步骤分 3 个部分:(A)总DNA(细胞内和游离)沉淀

(B)蛋白消化

(C)DNA 纯化。

(A)总DNA(细胞内和游离)沉淀

(如果只需要细胞内或者游离的 DNA,操作步骤见附录)1.将 40ml 的尿液转移到合适的离心管内。

注:如果处理≤1毫升的尿液，请使用微离心管。

如果处理>1毫升至14毫升的尿液，请使用15毫升的锥形管。

如果处理>14毫升至40毫升的尿液，请使用50毫升的锥形管。

2.添加 70ul 的尿液稳定剂到每 1m!的样品中，涡旋混匀。(例如 350ul 的尿液稳定剂到 5ml的尿液样品中)

添加了稳定剂的尿液可以在室温下最长保存 1 个月，需要提取核酸时，将添加了稳定剂的尿液涡旋振荡，混匀。

如果处理≤14ml的尿液添加 10ul纯化珠(使用之前需要涡旋混匀)3.

如果处理 14-40m!的尿液，需要添加 20ul 纯化珠(使用之前需要涡旋混匀)。

4.在 3，000xg 下离心 15 分钟。收集细胞沉淀。操作方案：

以下离心操作步骤的离心力均在 10,000 - 16,000 x g 之间进行。

1. 使用刀片或手术刀把 DNA 片段从琼脂糖凝胶上切除下来并且移置到 1.5 ml 小型离心管内.

Note: 从凝胶上切下的琼脂糖尽可能的要少.

2. 将 3 倍体积的 溶胶液 添加到每 1 体积从凝胶上切下的琼脂糖切块中.

Example:对 于 200 µl (mg) 的 琼 脂 糖 凝 胶 切 块 ， 添 加 600 µl 的 ADB 缓冲液.

3. 在 37-55℃ 下温水浴 10~20 分钟直到凝胶切块溶解.

Note: 确定凝胶切块溶解是很重要的步骤. 在温水浴过程中可辅以温和的搅拌有助于凝胶的溶解。 如果 DNA 大小超过 8kb ，加热之后需要额外添加等量胶块体积的水。例如： 200 µl (mg) 的琼脂糖凝胶切块，添加 600 µl 的 ADB 缓冲液.加热之后添加 200µl 的水。

4. 将溶解的琼脂糖切块溶液放到 2 号柱 中并把柱套在 收集管 里.

5. 离心 1 分钟. 去除滤出液. Note: 柱所能容纳的样品体积为 800 µl. 所以, 如果样品体积超过 800 µl 时，柱就要被多次填充和离心。

6. 添加 200 µl 的 DNA 洗涤液 到柱中离心 1 分钟，去除滤出液.

7. 重复第 6 步洗涤步骤.

8. 可选步骤：将收集管中的废液倒掉，并将 2 号柱套回收集管中额外离心2 分钟，尽量除去洗涤液，以免洗涤液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 直接添加 25 µl DNA 洗脱液到柱基质中. 将柱套在 1.5 ml 离心管中离心 1 分钟来洗脱

DNA.Note :从柱中洗脱出的 DNA 产量与 pH 和温度有关. 如果使用水来洗脱， 确保 pH 是>6.0. 在向柱中加入水后静置 1 分钟可增加较大 (> 6 kb) DNA 的产量.在 60-70 oC 的水中洗脱 DNA 可增加较大DNA(> 10 kb)的产量

Note: 如果试验需要的话 TE 缓冲液 (10 mM Tris-HCl， 1 mM EDTA， pH 8.0) 或改进的TE (10 mMTris-HCl， 0.1 mM EDTA， pH 8.5) 也可用来洗脱.

在水中得到的超纯 DNA 可进行后续试验.

欢迎订购：

天津益元利康生物科技有限公司现货供应简石生物尿液DNA提取试剂盒（离心柱）（TD361），欢迎选购！