贴壁细胞传代的方法和注意事项

　　细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础。其中，细胞传代是将部分细胞分离出来，重新接种到新的培养皿中，使细胞重新获得足够的营养条件和生长空间的过程。对于贴壁生长的细胞，细胞密度长到80%-90%时，细胞状态最好，此时可进行细胞传代。下面让我们一起来看看贴壁细胞传代的方法和注意事项吧！
 

　　一、贴壁细胞传代（以T25瓶为例）
 

　　1.显微镜下观察细胞汇合度大于80%即可传代；
 

　　2.将移液管、移液枪、T25培养瓶、1ml枪头、PBS溶液等放入超净工作台，紫外灯灭菌30min后再通风30min；
 

　　3.培养基放置37℃水浴锅预热；
 

　　4.将胰酶和培养基用75%酒精消毒后放入超净工作台；
 

　　5.在培养箱内旋紧培养瓶瓶盖，拿出细胞，用75%酒精消毒后放入超净工作台；
 

　　6.吸弃上清液；
 

　　7.用5mlPBS液润洗细胞，吸弃PBS；
 

　　8.培养瓶加入1ml胰酶，轻轻晃动使胰酶充分覆盖细胞层，放入培养箱中孵育；
 

　　9.在显微镜下观察细胞解离状况，细胞明显变圆、细胞间隙增大，轻轻晃动可呈现流沙状即可终止；
 

　　10.加入4ml培养基终止消化，吹打细胞层表面数次，使其分散成单个细胞；
 

　　11.收集细胞悬液到50ml离心管中，1000-1200r/min离心，3-5min去除胰酶；
 

　　12.离心管用75%酒精消毒后放入超净工作台，吸弃上清液，用新鲜培养基重悬细胞；
 

　　13.将细胞悬液按推荐传代比例分装到培养瓶，补充适量培养基，摇晃使细胞分布均匀，并做好标记；
 

　　14.在显微镜下观察细胞密度及状态，把细胞放回培养箱，旋松瓶盖以便进行气体交换。
 

　　二、注意事项：
 

　　1.PBS润洗细胞时，从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入PBS，避免冲刷到细胞层；
 

　　2.不同细胞的胰酶所需消化时间不一样，消化时间根据细胞贴壁特性而定，可每30s观察一次。
 

　　更多有关贴壁细胞传代的方法和注意事项，请联系天津益元利康生物科技有限公司！