Toxin金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的应用

金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B, SEB）由于具有超抗原性，且在SEs系列毒素中毒性最qiang、最为耐热，对肠胃道蛋白酶最有抵抗性，在食品加工过程中极难去除，故对人类健康具有严重的威胁。

《金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体的研制及双功能免疫层析试纸条产品开发》一文中，就首先以SEB为免疫原，通过免疫Balb/C小鼠，测定小鼠血清效价、细 胞融合、筛选阳性杂交瘤细胞、亚克隆以及抗体配对等一系列操作，最终获得两株能稳定分泌抗SEB单克隆抗体的细胞株（分别命名为15H11和5D6），且两株抗体能够与SEB形成稳定的“三明治"夹心结构；两株抗SEB单克隆抗体均为IgG1 亚型，亲和常数分别为2.08 × 109 M以及1.81 × 109 M；且与其它四种常见肠毒素 SEA，SEC，SED以及SEE均无交叉反应。 其次，以油氨修饰的金纳米粒子（AuNPs@OA）、红色聚集诱导发射荧光染料（AIEgens）为比色、荧光功能材料，1-十八烯马来酸酐聚合物（PMAO）为填充剂，通过微乳液法合成了具有Janus结构的比色-荧光双功能纳米微球（JAIE@Au NBs）。由于AuNPs@OA和AIEgens在聚合物PMAO中溶解度存在极大差异，在氯仿蒸发过程中AuNPs@OA和AIEgens发生明显相分离，导致AIEgens自动聚集成核，PMAO形成壳层，而AuNPs@OA分布在PMAO层一侧，因而形成了具有Janus结构的比色-荧光双功能J-AIE@Au NBs。由于AuNPs与AIEgens存在物理间隔，且AuNPs在AIEgens一侧，因此有效地消除了两者之间的能量转移，且降低了荧光内滤效应，从而极大地保留了AIEgens的荧光信号。随后将单克隆抗体15H11标记J-AIE@Au NBs获得免疫探针，在NC膜上喷涂抗体5D6制备获得比色定性以及荧光定量检测SEB的免疫层析试纸条J-AIE@Au-ICA。在最佳条件下，该试纸条检测全脂乳中SEB的定量线性范围为0.39 ng/mL ~ 400 ng/mL，最di检测限（Limit of detection, LOD）为0.09 ng/mL，灵敏度较传统ELISA法提高了近70 倍；同时，采用比色法裸眼定性检测SEB的最di检测限为1.56 ng/mL。该试纸条 检测全脂乳中SEB的批内、批间加标回收率为86.0 2%至115 %，变异系数介于 4.97 %至12.86 %之间，且与其它4种常见肠毒素无交叉反应。此外，该试纸条检 测生牛乳以及脱脂乳中SEB的LOD分别为0.19 ng/mL和0.19 ng/mL。随后，将试纸 条分别用于检测人工污染SEB的全脂乳、生牛乳和脱脂乳样品，结果显示回收率 介于91.04 %至118.82 %之间，变异系数介于3.91 %至12.86 %之间。以上结果表明，本研究建立的比色、荧光双功能试纸条能够实现对多种牛奶中的SEB快速且准确的定量分析。

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