小鼠肿瘤的最佳储存——美天旎MACS组织保存液

一、产品背景

在研究项目中，当向外部来源运送样本或从外部来源运送样本时，或者需要在不同时间收集样本时，或者仅仅是当样本不能一次全部处理时，通常需要储存新鲜器官和固体组织样本。在这些情况下，短期储存可以充分灵活地在几天内对组织进行进一步处理。为了从储存的组织中分离活细胞，必须避免在储存期间出现坏死和凋亡。此外，必须防止细胞活化，以及细胞多能性的变化，以保持细胞的生理和功能状态。一种常见的储存方法是冷冻组织样本，但这经常导致解冻后的细胞死亡率很高，并且对运输构成挑战。

为了克服所有这些问题，美天旎专门开发了MACS组织保存液，它可以在2-8°C下将新鲜固体组织最佳储存至少48小时。在此存储期内，细胞的活力、功能和激活状态得以保存，并防止细胞应激相关基因的诱导。MACS组织保存液已经过多种人类和小鼠组织的测试，包括肿瘤、肺、脾、脑和骨骼肌。

二、材料与方法

1. 肿瘤储存

收集小鼠CT26肿瘤并切成大小相似的块。将等量的肿瘤切片分别放入装有5 mL MACS组织保存液的两个15 mL试管中，于2-8℃保存24和48小时。在每个zhi定的时间点，新鲜和储存的肿瘤片以相同的方式处理。

2. 肿瘤分离

使用带加热器的gentesmacs™ Octo解离器和Tumor Dissociation Kit, mouse根据说明书解离肿瘤。解离后，获得的单细胞悬浮液使用MACS Smart Strainers(70µm)过滤。其中一部分细胞用于流式细胞术分析，其余细胞保存在RLT缓冲液(Qiagen)中，待进一步处理用于基因表达分析。

3. 流式细胞术分析

使用以下抗小鼠RE Afinity®抗体流式细胞术分析TIL群体:CD45 (REA737)、CD3 (REA614)、CD25 (REA568)、CD69 (REA937)、CD4 (REA604)、CD8a (REA601)、CD19 (REA749)、CD80 (REA983)和CD86 (REA1190)。使用MACSQuant®Analyzer 10对样品进行分析。碘化丙啶用于排除死细胞。死细胞排除后，从门控CD45+活细胞中分析TIL群体。

4. 基因表达分析

使用RNeasy®Mini Kit (Qiagen)从新鲜和储存的细胞中分离RNA。使用Qiagen公司的RT2第一链试剂盒(RT2 First Strand Kit, Qiagen)生成cDNA，并使用Qiagen公司的RT2 Profiler®PCR阵列(Stress and Toxicity PathwayFinder®，小鼠)和GeneGlobe®分析工具分析基因表达。

三、结果

MACS组织保存液可保存细胞活力和TIL群体组成长达48小时，CT26肿瘤在收集当天或在MACS组织保存液中储存24和48小时后处理。分离后，流式细胞术分析TILs的总细胞活力和组成。在新鲜和储存的样品中，细胞活力均超过85%(图1A)。此外，TILs的组成也随着时间的推移而保持不变(图1B)。通过分析活化标记CD25、CD69、CD80和CD86在特定TIL群体中的表达，发现细胞的活化状态也得以保存。

图1:CT26小鼠肿瘤在MACS组织中4°C保存

储存液24或48 h。解离后，流式细胞术分析细胞总活力(A)和TIL组成(B)。细胞频率参照活细胞CD45⁺。另外，CD3⁺和CD19⁺细胞子集的频率分别指对应的亲本CD3⁺和CD19⁺群体。

在MACS组织保存液中，细胞应激相关基因的表达被阻止，分子分析的主要关注点是储存条件诱导细胞应激和基因表达的变化。这是通过分析细胞应激途径相关基因的表达来研究的。将储存样品的基因表达与新鲜样品进行比较。在储存24或48小时后，细胞中未观察到细胞应激相关基因的表达发生重大变化，基因表达与新鲜样品细胞相当(图2)。

图2:新鲜肿瘤和储存肿瘤细胞中细胞应激相关基因的表达情况。从新鲜和储存的CT26肿瘤细胞中分离RNA，分析细胞应激相关基因的表达。热图显示了与新鲜组织相比表达率的倍增变化。

四、结论

•  MACS组织保存液是一种强大而方便的解决方案，适用于不同组织样品和器官的短期储存。

•  细胞活力、细胞成分和细胞激活状态可保存至少48小时。

•  最后，MACS组织保存液可以防止细胞应激反应，因为与新鲜样品材料相比，细胞应激相关基因表达水平的变化保持在最di水平。

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