一文了解CCK-8检测实验

CCK-8检测实验（细胞活力检测实验）是一种常用的细胞增殖和毒性检测方法，通过测量细胞内酶活性的变化，从而来评估细胞的活力。CCK-8检测是一种简便、快速、高灵敏度的细胞活力检测方法，适用于多种细胞类型和实验条件。本文主要从实验原理、实验步骤、注意事项等方面来介绍该实验。

一、实验原理

该试剂中含有WST-8，它在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒染料formazan，生成的甲瓒物formazan的数量与活细胞的数量成正比，因此可以用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

活力计算:

细胞活力＊(%）=[A(加药)—A（空白）]/［A（0加药）—A（空白）] ×100

A（加药）：具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白):具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加药）:具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力。

二、实验步骤

1. 实验前将细胞接种96孔板，每组铺5个平行孔（孔的外围一圈加PBS，以防边缘效应影响实验组），在96孔板中配置100μl的细胞悬液，将培养板在培养箱预培养24小时。

2. 进行CCK-8实验，弃掉孔内原有培养基并每孔加入新配制的含有终体积1/10 CCK-8试剂盒的完quan培养基，37℃细胞培养箱内孵育1-4hr（根据细胞量决定时间长短，细胞越多OD值越大且随着孵育时间的延长OD值也会变大，最适OD值应保持在2以内）。

3. 在450nm处测定吸光值。

4. 计算细胞增殖率：（实验组OD-空白组OD）/（对照组OD-空白组OD）

三、注意事项

1. 细胞接种密度要适中，过低或过高的密度都会影响实验结果的准确性。

2. CCK-8试剂的添加量要适量，过多或过少都会影响实验结果。

3. 培养时间要适当，过长或过短的培养时间都可能导致实验结果的偏差。

4. 测定吸光度时，要确保酶标仪的校准准确，以获得可靠的实验数据。

5.如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

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