重组蛋白产品正确溶解步骤

一、重组蛋白

重组蛋白（recombinant protein）是指应用重组 DNA 或重组 RNA 技术而获得的蛋白质。重组蛋白工程先应用基因克隆或化学合成技术获得目的基因（gene of interest，GOI），连接到适合的表达载体，导入到特定的宿主细胞，利用宿主细胞的遗传系统，表达出有功能的蛋白质分子。重组蛋白的正确溶解步骤包括离心、溶解和（可能的话）进一步处理。

二、重组蛋白溶解步骤一

开盖前离心试剂管。冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上，所以在打开塑料瓶盖前，需将冻干粉通过离心收集到管底，以便用很小体积的液体即可将冻干粉wan全溶解。一般需要3000-3500rpm离心5min，效果良好。如果没有高速离心机，可以使用较低的转速进行较长时间的离心。

‌三、重组蛋白溶解步骤二

用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml，不可振荡。这个步骤即为溶解步骤，非常重要。使用推荐的溶液将冻干粉重悬至适当的浓度。对于短期实验（<=7天），建议的浓度不低于100 μg/mL。对于长期实验（>=7天），需要使用含载体蛋白（如BSA、HSA、FBS或海藻糖）的溶液进一步稀释，然后分装冻存于-20°C至-80°C。一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉。蛋白的溶解性与很多因素有关，其中比较重要的是pH值和离子强度。产品说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白wan全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符，很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能wan全溶解或者根本无法溶解，这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。

四、重组蛋白溶解步骤三

该重悬液在2-8℃最长可保存1周。用说明书上推荐的溶液将细胞因子或重组蛋白重悬到推荐的浓度后，细胞因子或重组蛋白可放置在2-8℃，即冰箱的冷藏室。在这种条件下，细胞因子或重组蛋白的活性最长可保持1周。这对一个周期为5-7天的实验，如DC(树突状细胞)的诱导成熟是足够的。在此期间，只要每次从冰箱里吸取一定量的细胞因子或重组蛋白溶液加入到培养体系内即可。

其实，说明书上推荐的浓度对于一般的实验来讲是比较高的。所以用户通常会将该溶液进一步稀释后再放在4℃保存，待1周内用完。如进行稀释，必须遵照下面第4步的方法，即需用含载体蛋白的溶液进行稀释，否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降，细胞因子或重组蛋白的总活性则大为减弱。

五、RD重组Monkeypox蛋白产品推荐

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