BCA法实验原理、操作步骤

一、实验原理

BCA(bicinchoninic acid,二辛可酸)法，测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应，使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。

‌二、操作步骤

准备标准品和样品‌：将标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀释成一系列已知浓度的溶液，作为标准曲线。同时，将待测样品适当稀释，确保其在标准曲线的线性范围内。

配制BCA工作液‌：根据标准品和样品数量，按照50体积的试剂A和1体积的试剂B的比例配制适量的BCA工作液。例如，如果测定4个样品，每个样品做3个复孔，则需要配制12份200μL的工作液。

‌加样‌：在96孔板的相应孔中加入20μL的标准品或待测样品，然后加入PBS或其他缓冲液至总体积为20μL。

‌加入BCA工作液‌：向每个孔中加入200μL的BCA工作液，轻轻混匀。

孵育‌：将酶标板放在37℃孵育30分钟，或者室温下孵育2小时，使反应wanquan。

测定吸光度‌：使用酶标仪在562nm波长下测定各孔的吸光度。

绘制标准曲线并计算样品浓度‌：将标准品的吸光度和对应的浓度绘制成标准曲线。然后，将待测样品的吸光度代入标准曲线，计算出样品的蛋白质浓度。

三、注意事项

确保所有操作在无菌条件下进行，避免污染。

每次测定最好制作新的标准曲线，因为BCA反应可能会受温度和时间的影响。

为保证结果的准确性，每个样品应设置至少3个复孔，并取平均值进行计算。

注意试剂的保存条件和有效期，确保实验的准确性。

四、蛋白浓度测定试剂盒推荐

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