大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备

　更新时间：2024-09-25 点击量：272

一、DH5α

DH5α是大肠杆菌(Escherichia coli)的一种感受态细胞系，通常被用于分子生物学实验中。这些细胞被设计成对外源DNA接受性较高，因此在分子克隆、DNA转化和质粒扩增等实验中被广泛使用。DH5α感受态细胞对于吸收外源DNA特别有效，这使得它们在基因工程和分子生物学研究中成为常见的实验室工具。

二、操作步骤

1、前夜接种受体菌（DH5a或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；

2、取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）；

3、将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷；以下步骤需在超净工作台和冰上操作；

4、吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟；

5、4℃下3000 g冷冻离心5分钟；

6、弃去上清，加入100微升预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟；

7 、4℃下3000 g冷冻离心5分钟；

8 、弃去上清，加入100微升预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；

9 、细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15% - 20%甘油）后超低温冷冻贮存备用（－70℃）。