无血清培养基配方、使用方法

一、前言

细胞培养技术在生命科学研究领域是must的。在科研上，细胞培养基（medium）一般都会加入血清（Serum）来补充蛋白质（protein）、生长因子（growth factor）或其他营养物质（nutrients）等，大部分细胞培养会选择使用胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）。近年来也陆续有多样的血清种类，例如：人类血小板生长因子（platelet-rich plasma, PRP）、小牛血清（bovine growth serum, BGS）等，中科百抗自研产品：Bestop™特级胎牛血清来源于无菌采集的健康胎牛血清，适用于各种难培养肿瘤细胞、难培养原代细胞、部分干细胞（不包括难贴壁细胞），验证的细胞典型代表有：A2780、SK-Hep-1；HUVEC、神经元细胞。

二、无血清培养基介绍

经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的wanquan培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清培养基一直是生物科学工作者努力的目标。如有需要无血清培养基，请联系天津益元利康生物科技有限公司。

三、无血清培养基的基本配方

基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。

用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。

添加组分包括以下几大类物质：

(1）促贴壁物质

许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。

(2）促生长因子及激素

针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞bi要的，胰岛素。

(3）酶抑制剂

培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。常用的是大豆胰酶；抑制剂。

(4）结合蛋白和转运蛋白

常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。

(5)  微量元素

硒是最常见的。

四、使用方法

目前，血清仍是动物细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。