Transwell迁移实验步骤

一、细胞迁移

     细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。细胞迁移实验是研究细胞在体外条件下移动能力的一种实验方法，广泛应用于细胞生物学、肿瘤学和免疫学等领域。细胞迁移实验基于细胞对环境变化的反应能力，这些变化可以是物理的（如空间间隙）或化学的（如梯度差）。实验目的是模拟并观察细胞如何在这些条件变化下移动，从而了解细胞迁移的机制和影响因素。

二、Transwell细胞迁移实验

1、简介

Transwell实验，也称为Transwell迁移或侵袭测定实验，是一种用于细胞生物学和分子生物学的实验室技术，用于研究细胞通过多孔膜的运动。它通常用于研究细胞对各种刺激（如生长因子、趋化因子或细胞外基质成分）的迁移、趋化性和侵袭。Transwell实验对于评估细胞通过多孔屏障迁移或侵袭的能力特别有用，多孔屏障模拟细胞必须穿过体内组织的生理条件。Transwell实验涉及Transwell小室（插入物）和孔板，它们是一种由分隔两个隔室的渗透膜组成的装置。 通常，顶部室充满细胞，而底部室包含化学引诱剂或诱导细胞迁移的物质。多孔膜允许细胞通过膜上的小孔从顶部室迁移到底部室。

2、步骤

1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每个Transwell上室添加适量无血清培养基（通常为100-200 µL），向下室添加含有化学诱导剂的培养基（通常为600-800 µL）。

2）用无菌PBS清洗培养的细胞。使用胰酶消化细胞，并加入含有无血清培养基的管中中止消化。计数细胞，并调整细胞悬液至适当浓度（例如1×105 cells/mL）。

3）向Transwell上室中添加适量的细胞悬液（通常为100-200 µL）。小心处理以避免气泡形成。

4）将Transwell板放入37°C、5% CO2培养箱中孵育24-48小时，以允许细胞迁移。

5）孵育结束后，取出Transwell插入物。

6）用无菌PBS轻轻清洗上室，去除未迁移的细胞。

7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室迁移的细胞，固定时间通常为10-15分钟。

8）用PBS清洗并染色（如0.1%结晶紫染色或DAPI染色）。

9）用棉签擦去上室膜上的未迁移细胞。使用显微镜观察下室膜上的迁移细胞，并拍摄图像。计数多个视野中的迁移细胞数，计算平均值。

10）汇总迁移细胞数量，进行统计分析，绘制细胞迁移图。

结果图展示

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三、实验中会用到的PBS推荐

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