三一造血STEMERY——人 γδT 细胞高效扩增试剂盒说明书

一、产品介绍 

【中文名称】人 γδT 细胞高效扩增试剂盒 

【英文名称】Human γδT cell robust expasion kit 

【编号】 CT-004 

【包装规格】 2L/套

【试剂盒组成】

【预期用途】

适用于从人新鲜外周血、浓缩白细胞来源的单个核细胞以及冻存的单个核细胞在体外扩增成 γδT 细胞。

【贮藏条件与有效期】GD-I，GD-II，GD-IV 置于 2-8°C 保存，有效期为 12 个月；GD-III 置于-20°C 保存， 有效期为 24 个月，置于 2-8°C 保存，有效期则为 3 个月，并勿反复冻融； 生产日期，有效期至：见标签。

【产品特性】 γδT 细胞具有在体内快速反应的特性，在受到刺激时，会先于 αβ-T 细胞释放促炎性细胞因子 （IFN-γ 和 TNF-α 等）。γδT 细胞能够激活 NK 细胞的肿瘤细胞毒作用，与 DC 细胞互刺激成熟， APC 细胞抗原呈递的功能，激活 αβ-T 细胞的免疫效应，γδT 细胞的杀伤作用具有非 MHC 限制性， 广泛的杀瘤谱，已知对至少十几种肿瘤细胞有杀伤作用。 γδT 细胞在人外周血含量很少（1-5%），本产品能够将外周血中的单个核细胞大规模扩增成 γδT 细胞，具有扩增效率高，目的细胞百分比高的特点，起始单个核细胞经过 14 天培养，总细胞 数可以扩增约 30±10 倍左右，γδT 细胞其纯度可达 80%左右，并且全程无血清培养为基础和临床 研究使用 γδT 细胞提供一个有力的产品。

二、操作步骤

1. 第 0 天，将制备好的单个核细胞（MNC）按 1.5-2.0M cells/mL 细胞密度铺于 T-75 瓶中，加 入 GD-IV 培养基 45mL，GD-I 500μL，GD-II 100 μL，GD-III 5mL 以及浓度为 100 万 IU/mL 的 IL-2 50μL（即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL）； 注意：

1）IL-2 使用 1mL GD-IV 培养基溶解（IL-2 溶解后浓度为 100 万 IU/mL），存于 2-8°C 冰箱， 存放时间不超过两周。建议将 IL-2 溶解后分装于无菌试剂管后保存于-20°C 冰箱，使用时溶解 即可，注意不要反复冻融，且不可使用长期置于 2-8°C 的 IL-2，否则将严重影响本试剂盒的扩 增效果；

2）请勿将 GD-III 从-20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中，GD-III 溶解wan全后，轻轻摇晃瓶 身，使其温度与成份均一，摇晃时，请小心避免气泡产生；

  3）在细胞铺加后与第 3 天补液之前的这段时间内，尽可能不要移动培养瓶，以免使其受到温度 变动，震荡等物理因素的干扰。

2. 第 3 天（3×24h），补加 95ml GD-IV 培养基，GD-III 5mL，IL-2 100μL（即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL）转入细胞培养袋，此时袋子含 150mL 培养液； 注意：为使更多的细胞转入到培养袋中，可先将 T-75 瓶中的细胞吹打均匀，全部转入培养袋中， 再用部分新鲜配制的培养液润洗培养瓶，并再次转入培养袋中，最后补齐培养液即可；

3. 第 5 天，往培养袋补加 150mL GD-IV 培养基，GD-III 7.5mL，IL-2 150μL（即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL），此时袋子含 300mL 培养液；

4. 第 7 天，往培养袋补加 300mL GD-IV 培养基，剩余的 GD-III，IL-2 300μL（即 IL-2 终浓度 为 1000IU/mL），然后分成两袋，此时每个袋子含 300mL 培养液；

5. 第 9 天，分别往培养袋补加 300ml GD-IV 培养基，IL-2 300μL（即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL）， 此时袋子含 1100mL 培养液； 注意：D5-9 为细胞增殖高峰期，补液时注意根据细胞生长状态和密度添加培养基以保持细胞良 好生长状态。

6.第 11 天，分别往每个培养袋补加 400mL GD-IV 培养基，IL-400μL（即 IL-2 终浓度 1000IU/mL） 

7.第 13-14 天，收获目的细胞。

注意事项：

1）在使用本试剂盒时，可先将 GD-I 与 GD-II 试剂管低速离心（如 1000g/min 离心 1min 等）， 确保试剂足量；

2）由于样本之间的差异性，在按上述操作说明操作时，可根据具体细胞生长状态，调整补液时 间；

  3）在使用本试剂盒时，由于样本之间的差异性，每个样本的细胞长速与诱导率存在差异。

 如需要，请联系三一造血代理——天津益元利康生物科技有限公司。